HIV感染和和AIDS的实验诊断.ppt

HIV的病毒培养与分离； HIV的毒株分析； HIV核酸测定；（Abbott LCx HIV-RNA） P24抗原的测定；第四代酶免试剂 HIV抗体测定：常分为初筛和确认两步。 初筛实验室和常用初筛方法有： HIV病毒抗体金标快速法（Instant CHEK?-HIV1+2） 爱滋病毒抗体筛选酶免试剂（MUREX HIV） Determine HIV1+2+0亚型试纸（Abbott） 双抗原夹心酶免试剂 确认试验主要是免疫印迹技术（Western Blot,WB） 四）HIV的实验诊断 1.HIV抗体检测 试剂盒 1985.3 HIV-1 1990.6 HIV-2 1992.4 HIV-1/2 敏感度和特异度不断提高．三代ELISA均达99%以上 . 1998. 三代ELISA检测ＨIV1/HIV2(P24Ab) . 2008. 四代ELISA (ＨIV1/HIV2 (P24Ag)) 快速诊断试剂(胶体金标记) EIA实际试剂盒进展 代次 抗原 方法 检测时间 1 全病毒 间接 2个月 2 重组或多肽 间接 42-45d 3 重组+多肽 夹心 22d 4 抗原+抗体 夹心 16d(抗原5pg) 5 基因扩增法，基因芯片 6-11.5d HIV抗体筛查试剂 1. Murex HIV 1.2.O： 第三代抗体试剂的双抗原夹心法模式 两步法酶标法测试， 可以用来检测HIV抗体I型，II型和O亚型。 手工/自动化酶标仪检测，用血清/血浆样本。 Murex HIV-1.2.O. 夹心模式 板底 样本 结合物 抗原包被（1） 辣根过氧化物酶标记抗原（2） 模式：双抗原夹心法。 Murex HIV-1.2.O 抗原 HIV-1 env HIV-1 env HIV-1 env HIV-1 env HIV-1 env HIV-2 env HIV-1 env HIV-1 p24 HIV-1 env POD POD POD HIV-O HIV-O HIV-2 多肽抗原 重组抗原 板 结合物 CD SD POD HIV-1 env HIV-1 p24 HIV-1 p24 P41/p36 前带/后带效应的机制 两步冲洗法---可避免此效应 低浓度的结合物 高浓度的结合物 HOOK效应的机制 Ag 变构是二步夹心酶免出现钩状HOOK的原因． 被测抗原如具有多重决定族与亲和性高于包被抗体的酶标抗体发生交叉重叠结合，由于立体效应和互相挤压， Ag分子发生构象改变而从包被抗体上脱落，造成反应信号下降． 2.POCT 在艾滋病毒检测中的应用 快速Determine HIV1/2 O抗体检测 第三代抗体试剂的双抗原夹心法模式 可以用来检测HIV抗体I型，II型和O亚型。 可用手指/静脉血，15分钟出结果，可用血清/血浆/全血样本结果可密封保存。 快速试剂研制的背景 就地检测（POCT）概念： 急诊----手术，紧急输血，事故紧急检测。 （医护人员和病人的保护） 筛查概念： 母婴筛查，就职，移民，性及吸毒犯罪人员体检等----简单易用。 日常检测： 大，中，小型实验室，及极少量HIV样本实验室，偏远地区，实验室条件或设备不齐，外出检测----方便携带，使用。 结果可保存。 灵敏度排名及分数 产品 排名 分数 Genscreen HIV 1/2 1 237 Murex HIV 1.2.O 2 235 Imx HIV ? III 3 231 Ortho HIV 1/2 3 231 Abbott HIV ? Beads 4 229 Murex 1/2 5 227 Organon Uni II..x5 .. 214-225 Innotest HI 1/2 Last 178 3. 第四代试剂及抗原有关的试剂 HIV 抗原/抗体联合试剂： Murex HIV Ag/Ab：第四代试剂 大大提高灵敏度的筛查试剂，进一步缩短了 检测“窗口期” 。 RIA Delta HIV Ag/Ab：放免HIV抗原/抗体联合试剂。 ? HIV抗原试剂： Murex HIV抗原单克隆试剂： 临床上只用于HIV抗原检测以早期检测样本，