联合应用MLPA技术与基因测序技术检测DMD基因单个外显子缺失突变.pdfVIP

ChinMed 中国医药牛物技术2011年lO月第6卷第5期 Biotechnol。October2011，V01．6．No．5 DOI：10．3969／cmba．j．issn．1673·713X．2011．05．006 ·论著· 联合应用MLPA技术和基因测序技术检测 DMD基因单个外显子缺失突变 莫桂玲，胡朝晖，喻长顺，詹益鑫，朱庆义 【摘要】 1材料与方法 目的 提高检测DMD基因单个外显子缺突变失的准确 1．1材料 率，为DMD家系成员的遗传咨询和产前基因诊断提供准 1．1．1研究对象研究对象为来自全国各医院神 确的依据。 经科或儿科的患者，所有研究对象均签署知情同 意书。 方法 收集2009—2010年送本实验室进行DMD基因检 1．1．2主要材料 阴性和阳性对照品采用美国 测的血样185例，提取外周血DNA，以美国病理学家协 ofAmerican 会提供的DNA质控品分别为阴性和阳性对照，联合应用 病理学家协会(College Pathologists， MLPA技术、PCR技术和基因测序技术，分析其DMD基 MLPAkitP034一A2／P035一A2 因单个外显子的缺失情况。 DMD／Becker购自荷兰 MRC—Holland公司12-31 结果 185例样品中，有7例MLPA结果显示为DMD DNA提取试剂盒QIAamp DNAbloodmini 基因单个外显子缺失，经过PCR技术和基因测序技术验证 kit购自德国Qiagen公司； 9700 3130xl 后，其中的6例确实为DMD基因单个外显子的缺失，1例GeneAmpPCR仪和geneticanalyzer 为67号外显子的微小突变。 500 Marker ladder为美国ABI公司产品；DNA 结论联合应用MLPA技术、PCR技术和基因测序技术， (MDl01一MarkerI)购白天根生化科技(北京)有 可以提高检测DMD基因单个外显子缺失的准确率，避免 限公司：ActiTaq 将单个外显子的微小突变误判为缺失突变，为DMD家系 产品。 成员的遗传咨询和产前基因诊断提供准确的依据。 1．2方法 【关键词】肌营养不良，杜氏： 基因缺失； 核酸扩 1．2．1 样品采集及预处理 受试者安静状态下采 增技术： 寡核苷酸序列分析 集EDTA抗凝外周血2—3 ml。采用QIAamp www．cmbp．net．cn 中西医药生物技拳，2011，6(5)：347-352 DNAblood