细胞生物学复习资料-WT膜结构与膜蛋白廖军.docVIP

α helix： β sheet： 很难用β sheet预测膜蛋白： 蛋白质是功能的基本单位：fiber， globular protein（亲水外表+疏水内核） 不需要20-30个残基，小于20个仍能形成β sheet，很难确定是膜蛋白还是亲水的球蛋白疏水内核。 Ras Src Thy 疏水肽段插入 两种荧光标签标定蛋白，研究diffusion FRAP 激光漂白荧光，记录特定时间内重新回到该区域的荧光量。观测的是群体现象（area），而实际上不同区域的差别是非常大的，细节不清楚。Single particle tracking解决了这一问题，加深认识：1.random diffusion2.partial confinement 3 directed motion（特定轨迹） 小肠：tight junction靠近食物的蛋白非常结实（protein A）， 分子之间的蛋白 （protein B） 在细胞膜表面形成有规则排列的网格状模块，把不同蛋白用不同荧光进行标记，发现都只在自身周围摆动。 细胞膜上的骨架蛋白变形，细胞膜就会变得不结实。 PIP3：利用膜上的脂质分子传递信号，产生变形（如免疫细胞） 蛋白纯化 水溶性蛋白和膜蛋白的比较 Globular protein 外部水充当了一个小配体，有water shell, 内部的结合水（isolated），行使特定功能 内部结合水（cluster）：可以看成整个蛋白的部分 脂类与TM蛋白: BULK 位点 紧紧环绕膜蛋白作为一部分 作为功能蛋白来发挥作用 TM 的疏水基团在水环境中不稳定，会自发聚合或折叠，所以需要两亲性的detergent 四类detergent: SDS ，Non-ionic: 糖环长链，Bile Acid Salt，Zwitterionic detergents 不同的detergent 产生的micell 大小不一样 Detergent有一定的溶解度，并且必须超过CMC。 Nanodiscs将蛋白富集（在detegent中） 与骨架蛋白组装，用bio-bead去除detergent,将膜蛋白与nanodisc 组装。 膜蛋白小分子转运(物质：channel 、transport、pump)和电性质的转变(信号:GPCR） Na离子外高于内 K离子细胞内高于细胞外 Ca离子细胞内100nm，外高于内，千倍（内流）到万倍的差别，形成calsium pathway Mg离子的染料较难，Na K 可以通过以各种方式（包括电生理）研究 Proton（H）：维持pH 溶酶体 Cl离子是最重要的阴离子 水环境是极性的，小分子小到水分子不能包裹它时，如：氧气、 NO 能自由通过；但达到能形成水化层则不能自由通过；带电离子也不能自由穿过。 Coupled transport:同向、逆向（离子梯度:二级能量） ATP-drive pump（一级能量） Light-drive pump（一级能量） Pump形成离子梯度（二级），使carrier 和channel 发挥作用。 人造生命体需要20-30%的……（脂？） Pump 的能量来源。 ATP-derived pump：P:自磷酸化，构向改变，运输物质，形成离子浓度梯度 ABC： V：多个亚基组成，ATP水解形成质子梯度 F：通过质子梯度,形成ATP。 心肌：P pump 心肌的肌球蛋白和肌丝蛋白滑移，肌浆网 (钙库) 细胞内最大的钙库：内质网和线粒体 Sarcoplasmic：通过H+ 和Ca2+进行磷酸化与去磷酸化 天然朝内开放 ABC PUMP（物质运输， 最大的转运家族）: 有两个ATP domain 结合两个ATP时，就能dimerization 结合小分子，ATP水解，运输物质，恢复原构像 迄今未发现可逆运输 甚至可转运比本身更大的物质 细菌抗药性、癌症将化疗药pump到细胞外、 V-type 3个扇叶旋转带动上面的rotor旋转，生成ATP F: 相反，结合ATP引起，在细菌中分布 带动荧光beads 转动 Carrier（second energy） 红细胞表面摄取葡萄糖 Uniport：channel是特化的uniport Symport：同向 结构相似，方向相反的拟对称结构 Antiport：逆向 偶数次跨膜 利用sodium symport 进入，Na+通过Na-K 泵泵出，维持Na+梯度，保证葡萄糖不停被摄取。 Channel Channel具有选择性，不能