以保罗样激酶1为靶点的抗肿瘤药物的筛选及活性-首都医科大学学报.pdfVIP

2014年 6月摇 摇 摇 摇 摇 首 都 医 科 大 学 学 报 摇 摇 摇 Jun. 2014 第35卷摇 第3期摇 摇 摇 摇 Journal of Capital Medical University Vol郾35摇 No郾3 [doi:10.3969/j.issn.1006鄄7795.2014.03.015] ·基础研究 · 以保罗样激酶1为靶点的抗肿瘤药物的筛选及活性评价 张摇 晶摇 刘摇 伟摇 陈云雨摇 司书毅* (中国医学科学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选实验室,北京 100050) 揖摘要铱摇 目的摇 利用酵母模型进行保罗样激酶1(Polo鄄like kinase 1,PLK1)抑制剂的高通量筛选,并初步评估活性化合物的体外 抗肿瘤效果。 方法摇 采用噻唑蓝比色法(MTT法)检测初筛阳性化合物对不同细胞系增生的影响,酶联免疫吸附测定法(enzyme鄄 linked immunosorbent assay,ELISA)分析化合物对体外纯化的PLK1激酶的作用效果,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞 周期分布和凋亡率,免疫印迹(Western blotting)检测化合物对周期蛋白B1(cyclin B1)和PLK1的作用。 结果摇 利用酵母模型初 筛得到3个阳性化合物,MTT法检测显示1号和3号化合物能抑制多种肿瘤细胞的增生而对正常细胞的毒性很小,ELISA结果 显示2号和3号化合物对体外纯化的PLK1几乎无抑制作用,FCM检测显示 1号化合物处理组 G2/ M期细胞比例高于对照组, Western blotting表明1号化合物不影响PLK1的蛋白表达,能导致cyclin B1的表达增加。 结论摇 1号化合物通过抑制PLK1激酶 的活性发挥抗肿瘤作用而不影响PLK1的蛋白表达,有望成为靶向PLK1的抗肿瘤先导化合物。 揖关键词铱摇 保罗样激酶1抑制剂;抗肿瘤;细胞周期;凋亡;蛋白免疫印迹 揖中图分类号铱摇 R34 Screening and activity evaluation for potential inhibitors of human PLK1 Zhang Jing,Liu Wei,Chen Yunyu,Si Shuyi* (Institute of Medicinal BiotechnologyAcademy of Medical Sciences Peking UnionMedical College,The NationalLaboratoryfor Screening New (Microbial)Drugs(LSMD),Beijing 100050,China) 揖Abstract铱摇 Objective摇 To find potential small-molecularPLK1inhibitorsthroughhighthroughput screeningusingbuddingyeastassay and examine the invitroanti鄄tumoreffectsofthesecompounds. Methods摇 Theinfluencesofthepositivecompoundsoncellsproliferation were measured by MTT assays. ELISA assay was employed to explore their inhibition activities on purified recombinant human PLK1. Flow cytometry(FCM)was conducted to determine their effects on cell cycle and apoptosis in Hela cells. The levels of Cyclin B1 and PLK1were detected by Western blotting. Results摇 We got 3 hits from preliminary screening by yeast assay. In vitro antitumor results revealed that compounds 1and 3 showed the e