地衣芽抱杆菌的温和性噬菌体.pdfVIP

遗传学报，,13(3);179-183,1986 ActaGeneticaSinica 地衣芽抱杆菌的温和性噬菌体 II.DNA分子生物学特性的研究 汪训明严维耀袁汉英李育阳 复（旦大学遗传学研究所，上海） 增殖BIp7,BIp11,B1p16这一类群噬菌体并抽提其DNA，用电镜法测定噬菌体DNA长 度为62.75::1:1.47kb，并证实它们与又噬菌体相似，含有“个能使DNA环化的粘性末端。 DNA经碱部分变性后，电镜观察可以识别 BIp7DNA分子的R端与L端。用限制性内切酶 EcoRI,BamHI酶切 B1p7及BIP16DNA，经琼脂糖凝胶电泳后，观察到DNA分子的多态性。 温和性噬菌体在遗传学上具有独特功能，因而常被人们用作微生物遗传学分析中的 重要工具。此外，它还具有拷贝数高、安全性好、调控容易等特点，近年来作为遗传工程的 基因载体及基因调控模型而被人们所重视。地衣芽胞杆菌 B（acilluslichniformis）是很有用 的工业微生物之一，又发现有其自身的转化系统[51，因此很有研究价值。从25株地衣芽 抱杆菌中分离到7株温和性噬菌体，根据噬菌斑形态、噬菌体形态、溶源稳定性、血清学特 性及免疫性分为3个类群[I［]。本文采用核酸电镜技术，研究了DNA分子生物学特性，并 利用限制性内切酶研究了DNA在分子水平上的多态性。 材 料 与 方 法 一（）地衣芽抱杆菌噬菌体的制备 按 Miller191的平皿扩增法制备噬菌体裂解 液。 二（）噬菌体的纯化及其DNA 的制备 裂解液按汪训明等 〔‘所用的差速离心法 纯化噬菌体，并用 SDS、饱和酚抽提噬菌体 DNAo 三（）DNA分子的电镜观察和测量 DNA分子按 Davis方法131进行展层制样， 但采用0.1外磷钨酸 (PTA)溶液染色[10［]，以h(X174RF型DNA作为内标。在日立 H500H 型透射电镜下观察，拍片，底片经放大后测量其 DNA分子的长度。 (IM)DNA 分子的碱部分变性试验 按Wu改进81〔方法进行。新鲜的碱一甲醛母 液配制如下：0,68ml1MNa2CO3和10ml36-38拓甲醛液混和，用10NNaOH调pH 至10.8-11.8。取5m1上述一定pH值的母液和10zj1DNA(20pg/ml)温和地混合，DNA 溶解在 0.1MNaCl,2mMNa3EDTA溶液中。此样品在25℃保温，在不同时间间隔取出 2川样品，与 100川展开液混和，立即在底相液上展开 展（开液为30多甲酞胺，50tzg/ml Cyt.C,10mMEDTA,100mMTris·Cl(pH8.5)，底相液为 10mM Tris·Cl(pH8.5), 1mMEDTA)。 本文于1985年7月l.日收到． 180 遗 传 学 报 13卷 五（）限制性内切酶酶解及凝胶电泳 EcoRI, Barn HI、Psi13种内切酶是美国 NewEnglandBiolabs.Inc．产品，酶解按该公司介绍的条件进行。采用0.5多琼脂搪平板 凝胶电泳，电泳缓冲液是TAE(40rnMTris·HAc,2XnM-EDTApH8.0)0 图1典型的Blp7DNA分子的电镜照片，图中的小环是 价X174RF型DNA分子作为内标 Fig.1ElectronmicrographofthetypicalBIp7DNAmolecule.Thesmallcircle is中X174RFformmoleculeaslengthstandard 图2 Blp7和Blp16DNA的酶切电泳照片 Fig.2 GelelectrophoreticpatternsofBlp7andBlpl6DNAdigested with endonucleases a.,DNA＋EcoRI;b