实时荧光定量pcr研究进展及其在中药领域的应用-中国现代中药.pdfVIP

２０１６年２月　第１８卷　第２期 中国现代中药　ＭｏｄＣｈｉｎＭｅｄ Ｆｅｂ２０１６　Ｖｏｌ１８　Ｎｏ２ ·综述 · 实时荧光定量 ＰＣＲ研究进展及其在中药领域的应用△ 周良云，刘谈，王升，唐金富，康利平，郭兰萍 （中国中医科学院 中药资源中心道地药材国家重点实验室培育基地，北京　１００７００） ［摘要］　实时荧光定量ＰＣＲ（ＲｅａｌＴｉｍｅＰＣＲｏｒｑＲＴＰＣＲ）是一种在ＰＣＲ反应体系中加入荧光物质，利用荧光信 号对整个ＰＣＲ进程进行实时监测，从而达到对未知起始模板进行定量分析的方法。该技术具有操作简单、方便快 捷、灵敏度高、特异性强、动力学范围宽、污染率低等优点，被广泛应用于核酸定量等分析中。本文对实时荧光定 量的基本原理、定量类型及其在中药领域中的应用作一综述。 ［关键词］　实时荧光定量ＰＣＲ；中药领域；应用 ＲｅａｌＴｉｍｅＰＣＲａｎｄＩｔｓＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎＳｔｕｄｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ（ＴＣＭ）  ＺＨＯＵＬｉａｎｇｙｕｎ，ＬＩＵＴａｎ，ＷＡＮＧＳｈｅｎｇ，ＴＡＮＧＪｉｎｆｕ，ＫＡＮＧＬｉｐｉｎｇ，ＧＵＯＬａｎｐｉｎｇ （ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙＢｒｅｅｄｉｎｇＢａｓｅｏｆＤａｏｄｉＨｅｒｂｓ，ＮａｔｉｏｎａｌＲｅｓｏｕｒｃｅＣｅｎｔｅｒｆｏｒＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ， ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲｉｓａｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｍｅｔｈｏｄｏｆｉｎｉｔｉａｌｔｅｍｐｌａｔｅ，ｗｈｉｃｈｒｅａｌｔｉｍｅｍｏｎｉｔｏｒｓｔｈｅｗｈｏｌｅ ＰＣＲｒｅａｃｔｉｏｎｂｙａｄｄｉｎｇｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｓｕｂｓｔａｎｃｅｉｎｔｏＰＣＲｒｅａｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｓｉｇｎａｌＤｕｅｔｏｉｔｓａｄｖａｎｔａｇｅｓ ｏｆｓｉｍｐｌｅｏｐｅｒａｔｉｏｎ，ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔａｎｄｅｆｆｉｃｉｅｎｔ，ｔｒｅｍｅｎｄｏｕｓｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，ｈｉｇｈｌｙｓｅｑｕｅｎｃｅｓｐｅｃｉｆｉｃ，ａｌａｒｇｅｄｙｎａｍｉｃｒａｎｇｅａｎｄ ｌｏｗｐｏｌｌｕｔｉｏｎ，ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲｈａｓｂｅｃｏｍｅｏｎｅｏｆｔｈｅｍｏｓｔｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｍｅｔｈｏｄｓｏｆｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎａｎｄｓｏｏｎＴｈｉｓ ｒｅｖｉｅｗｄｉｓｃｕｓｓｅｓｔｈｅｔｈｅｏｒｙ，ｔｙｐｅｓｏｆｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎａｎｄｉｔｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｄｅｔａｉｌｅｄＴＣＭｓｔｕｄｙ ［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　ＲｅａｌＴｉｍｅＰＣＲ；ＴＣＭｓｔｕｄｙ；ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｄｏｉ：１０．１３３１３／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３４８９０．２０１６．２．０２７ １９９３年，Ｈｉｇｕｃｈｉ等人将 ＰＣＲ技术和封闭式检 物质，利用荧光信号对整个 ＰＣＲ进程进行实时监 测相结合，对目的核酸数量进行定量分析，提出了 测，从而达到对未知起始模板进行定量分析的目的。 荧光定量ＰＣＲ技术的概念。１９９５年美国ＰＥ公司成 它是一种将酶动力学、核酸扩增、光谱分析和实时 功研制了ＴａｑＭａｎ技术，１９９６年又推出了首台荧光 检测技术相结合的技术。随着ＰＣＲ反应的进行，反 定量ＰＣＲ检测系统，通过检测每个循环的荧光强 应产物不断累积，荧光信号强度也等比例增加。每 度，并使用Ｃ值进行分析，达到定量核酸的目的， 经过一个循环，收集一个荧光信号，这样就可以通 ｔ 自此ＲｅａｌＴｉｍｅＰＣＲ技术才得以真正的推广和应用。 过荧光信号强度变化实时监测 ＰＣＲ产物量的变化， 到目前为止，实时荧光定量已被广泛应用于基础科