斑节对虾谷氨酸脱氢酶基因克隆及氨氮胁迫对其时空表达的影响.pdfVIP

中国水产科学 2016 年 11 月, 23(6): 12361246 Journal of Fishery Sciences of China 研究论文 DOI: 10.3724/SP.J.1118.2016.16048 斑节对虾谷氨酸脱氢酶基因克隆及氨氮胁迫对其时空表达的影响 1 1, 2 1 1 1 1 1 周发林 , 陈劲松 , 黄建华 , 杨其彬 , 邱丽华, 马振华, 江世贵 1. 中国水产科学研究院 南海水产研究所, 农业部南海渔业资源开发利用重点实验室, 广东 广州 510300; 2. 上海海洋大学 水产与生命学院 上海 201306 摘要: 采用cDNA 末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends, RACE)获得了斑节对虾(Penaeus monodon) 谷氨酸脱氢酶基因(PmGDH) 的cDNA 序列。该序列全长2386 bp, 开放阅读框(ORF)为 1677 bp, 3ʹ非编码区(UTR) 为688 bp, 包括含有27 个碱基的poly(A)尾, 5ʹ非编码区(UTR)为21 bp 。ORF 可编码558 个氨基酸, 预测分子量为 61.837 kD, 理论等电点为6.57 。序列含有ELFV dehydrog N 与NAD bind 1 Glu DH 两个保守结构域, 37 个磷酸化 位点, 3 个糖基化位点。通过同源性、相似性以及系统进化树分析, 斑节对虾的 GDH 基因与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)GDH 基因的同源性和相似性最高, 并与其聚为一支。采用荧光定量的方法研究了PmGDH 基因在斑节对 虾不同组织、氨氮胁迫过程中差异表达情况。结果表明, PmGDH 的mRNA 在各组织中都有表达, 其中, 在肌肉组 织中表达量最高, 其次为眼柄神经, 在血淋巴与肠组织中表达量最低。96 h 氨氮胁迫后, 荧光定量 PCR 分析结果 表明PmGDH 在肝胰腺和鳃组织中的表达与对照组相比都具有显著差异(P0.05), 都具有不同程度的表达上调。表 明PmGDH 在氨氮代谢方面具有重要的作用, 参与了斑节对虾机体的急性氨氮胁迫应答反应。 关键词: 斑节对虾; 谷氨酸脱氢酶; 氨氮胁迫; 基因克隆; 组织表达 中图分类号: S917 文献标志码: A 文章编号: 10058737(2016)06123611 谷氨酸脱氢酶 (Glutamate dehydrogenase, 在, GDH-2 在酸性条件下活性更高, 除了可以降 EC, 简称 GDH)作为一种线粒体酶广泛存 低体内氨氮浓度, GDH 还有助于器官维持体内酸 在于植物、动物和微生物中, 是氨基酸分解代谢 碱平衡[7] [8] 。Jin 等 于 2015 年的研究表明 GDH-1 的关键性酶, 其在动物肝、肾和脑等组织中广泛 可以通过调控癌细胞内的α-酮戊二酸含量来维 分布, 活性很强, 可催化谷氨酸发生氧化脱氨基 持癌细胞内的氧化还原平衡。在甲壳动物中, 关 反应, 在甲壳动物氨氮代谢过程中发挥非常重要 于谷氨酸脱氢酶基因的研究目前还比较少。Wang 的作用[1−2] 。 等[9]于2012 年对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis) 的 根据现有文献报道, 谷氨酸脱氢酶共有 4 种 GDH 基因进行了克隆, 结果表明其开放阅读框长 亚型, 其中GDH-1 和GDH-2 是小型六聚体酶, 广 度为 1695