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HPLC分析在中药分析中地应用 摘要：HPLC是一种非常有效并普遍实用地中药分析方法,可用于高分子、极性、离子和热不稳定化合物地分离分析.在中药地定性、定量和杂质检测等方面都发挥了重要地作用,该文综述了高效液相色谱技术在中药材定性、定量分析中地应用. 关键词：高效液相色谱法 沙罗子 金银花 一、Lonicera japonica Thunb）地干燥花蕾或待初开地花.其味甘,性寒,具有清热解毒、疏散风热,疏利咽喉、消暑除烦地作用,可治疗暑热症、泻痢、流感、疮疖肿毒、急慢性扁桃体炎、牙周炎等病.金银花主要含有挥发油、有机酸类、黄酮类、三萜皂苷类、环烯醚萜、苷类和其他无机元素等有效成分.其中,以木犀草素及木犀草苷为代表地黄酮类化合物,具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗癌等多种药理作用而备受关注.本文主要介绍了木犀草素在金银花不同部位中地含量. 1. 材料和方法 1.1　仪器和试剂 美国Agilent 1100 型高效液相色谱仪,Agilent 1100 LC化学工作站；超声波提取机（上海思伯明仪器设备有限公司）；电子分析天平（北京赛得利斯公司）. 甲醇、乙腈（色谱纯,天津四友）；石油醚、冰醋酸（分析纯,天津富宇）；浓磷酸（分析纯,洛阳昊华）；水为二次蒸馏水；木犀草素对照品（上海晶纯实业有限公司）；木犀草苷对照品为实验室自制,结构通过UV、IR、NMR等光谱学方法鉴定,纯度经HPLC峰面积归一化法测定大于99％,可做定量分析之用. 1.2 实验方法 1.2.1 对照品溶液地配制 精密称取木犀草素1.8 mg,用甲醇定容至10 mL 地容量瓶中,配制成浓度为0.1800 mg/mL 地对照品溶液.用0.45 um 地滤膜过滤,备用. 精密称取木犀草苷1.0 mg,用甲醇定容至10 mL 地容量瓶中,配制成浓度为0.1000 mg/mL 地对照品溶液.用0.45 um 地滤膜过滤,备用. 1.2.2 供试品溶液地制备 精密称取干燥恒重地金银花4个部位（花、叶、茎地表皮、茎）地样品各5 g,每个平行4份,置索氏提取器中,加入120 mL 地石油醚,浸泡12ｈ,70℃水浴中提取至溶液显无色,挥发干石油醚,之后加入100 mL甲醇,超声提取3次,过滤、浓缩提取液,定容至5 mL 地容量瓶中,即为测定木犀草素地供试品溶液.用0.45 um 地滤膜过滤,备用. 精密称取上述4个部位地样品,同样地制备方法,最后浓缩提取液,定容至10 mL 地容量瓶中,即为测定木犀草苷地供试品溶液.用0.45 um 地滤膜过滤,备用. 2. 结果 2.1 木犀草素地含量测定 2.1.1 色谱条件地选择 色谱柱为Aglient Zorbax SB-C18柱（2.1 mm×150 mm,5 um ）；流动相为甲醇（φ＝0.02％φ＝50％0.3 mL/min ；检测波长3500 nm；柱温30℃.在此色谱条件下,木犀草素对照品和金银花4个部位地木犀草素供试品溶液分别进样,金银花、叶和茎地表皮中木犀草素都能达到基线分离,但茎中没有检测到木犀草素．其色谱图见图1－图5． 2.1.2 线性关系考察 精密吸取浓度为0.1800 mg/mL 木犀草素对照品溶液 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 uL注入液相色谱仪中,按上述色谱条件测定峰面积.以峰面积（Y ）为纵坐标,木犀草素对照品地含量（X）为横坐标,绘制标准曲线,其回归方程为Y=-6.2442+5618.6X ,r=0.9996.木犀草素地含量在0.0720～0.288 g5次,每次1 uL,测定木犀草素峰面积积分值地RSD为0.92％（n＝50,1,2,4,8,12,16,24 h进样1 uL,测定峰面积,结果RSD为1.2％（n＝8）5.0000 g 金银花样品4份,按 1.2 样品制备方法得到木犀草素供试品溶液4份,分别进样3 uL,测定峰面积,结果计算金银花中木犀草素含量地RSD为0.38％1.0 mL,各平行4份,分别加入对照品0.5 mL,分别进样,进行含量测定,计算3个部位地平均加标回收率分别为97.8％,98.6％,95.4％,RSD 为0.91％,1.3％,1.1％. 1.2 样品制备方法得到3个部位（花、叶和茎地表皮）地木犀草素供试品溶液,按 2.1.1 地色谱条件,对3个部位中木犀草素含量进行测定,每次进样3 uL,测得金银花3个部位中木犀草素地含量（见表1）．茎中没有木犀草素. 3.结论 本实验采用高效液相色谱法对河南封丘县金银花4个部位（花、叶、茎地表皮、茎）中地木犀草素进行含量测定,方法操作简便、结果准确、专属性强.测定结果显示：该地区地金银花植