基于不同方法测定土壤酸性磷酸酶活性的比较-中国生态农业学报.pdfVIP

2016 1 24 1 Chinese Journal of Eco-Agriculture, Jan. 2016, 24(1): 98104 DOI: 10.13930/ki.cjea.150496 * 李莹飞 耿玉清** 周红娟 杨 英 ( 100083) 土壤酸性磷酸酶与有机磷的矿化及植物的磷素营养关系最为密切。目前国内学者在测定酸性磷酸酶 活性时主要参照关松荫《土壤酶及其研究法》中以磷酸苯二钠为基质的测定方法, 而国外学者主要参照 Dick 《Methods of Soil Enzymology 》中以对硝基苯磷酸二钠为基质的测定方法(PNPP) 。但是, 在以磷酸苯二钠为基 质测定生成物的过程中, 常出现显色程度不明显的问题; 另外, 采用不同基质测定酸性磷酸酶活性也造成了 测定方法选择的困难。为合理选择土壤酸性磷酸酶活性的测定方法, 本研究选用酸性、中性和碱性土壤各 10 个土样, 分别采用以磷酸苯二钠为基质, 且在显色阶段分别加入pH5.0 醋酸盐缓冲液(DPP 1)和pH9.4 硼酸盐 缓冲液(DPP 2) 的方法, 以及PNPP 方法测定土壤酸性磷酸酶活性。同时也研究了不同pH 缓冲液和苯酚浓度对 生成物显色反应的影响。结果表明: 以磷酸苯二钠为基质、在显色反应阶段加入 pH ≤6 的缓冲液时, 苯酚和 2,6- 二溴苯醌氯亚胺不显色; 当加入pH ≥8 的缓冲液时, 两者之间显色且苯酚浓度和吸光值的Pearson 相关系 数极显著。这说明 pH 低是导致高苯酚浓度和 2,6- 二溴苯醌氯亚胺显色效果差的一个主要原因。此外, 采用 PNPP 方法测定时, 在酸性、中性和碱性土壤中, 10 个样本酸性磷酸酶活性的变异系数分别较 DPP 2 增加了 70.04% 、42.44%和21.17%; 极差分别是DPP 2 的27.18 倍、26.85 倍和39.43 倍。总之, 如果选用磷酸苯二钠 为基质测定土壤酸性磷酸酶活性, 应在显色阶段加入碱性硼酸盐缓冲液; 选用对硝基苯磷酸二钠为基质, 是 更为简单和灵敏的方法。 土壤 酸性磷酸酶活性 磷酸苯二钠 对硝基苯磷酸二钠 pH 显色 : S154.2 : A : 1671-3990(2016)01-0098-07 * Comparison of soil acid phosphatase activity determined by different methods ** LI Yingfei, GENG Yuqing , ZHOU Hongjuan, YANG Ying (Forestry College, Beijing Forestry University, Beijing 100083, China) Abstract Soil phosphatase, especially acid phosp