冬虫夏草实时荧光pcr检测方法的建立.pdfVIP

242 2012, Vol.33, No.22 食品科学 ※分析检测 PCR 马 骏，谢 力，陈永红，胡学难，高东微 (广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，广东 广州 510623) 摘 要：建立冬虫夏草高效、灵敏的分子检测方法。以冬虫夏草Cordyceps sinensis (Berk.) Saccardo核糖体(rDNA) 内 转录间隔区(ITS)为分子标记片段，通过对不同虫草同源序列的比对分析，设计对冬虫夏草具有特异性反应的实时 荧光PCR引物和探针。该引物检测的目标DNA长度为80bp，对冬虫夏草DNA模版的检测含量可低至0.0001ng/μL 。 冬虫夏草；实时荧光PCR ；鉴别 A Real-Time PCR Method for Detection of Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc. MA Jun ，XIE Li ，CHEN Yong-hong，HU Xue-nan ，GAO Dong-wei (Inspection and Quarantine Technology Center, Guangdong Enter-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Guangzhou 510623, China) Abstract ：An effi cient and sensitive method was established to detect Cordyceps sinensis (Berk.) Saccardo using real-time PCR. The internal transcribed spacer (ITS) region of ribosomal DNA (rDNA) in Cordyceps sinensis (Berk.) Saccardo. was used as a target molecular marker and sequence homology analysis was carried out on various Cordyceps species. A set of specifi c primer and probe for real-time PCR was designed which allowed the amplifi cation of 80-bp DNA fragments. The detectable DNA template concentration of the real-time PCR method for Cordyceps sinensis (Berk.) Saccardo was as low as 0.0001 ng/μL. Key words ：Cordyceps sinensis；real-time PCR ；identifi cation 中图分类号：Q939.99 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2012)22-0242-04 冬虫夏草是麦角菌科中华虫草菌Cordyceps sinensis 全世界目前已报道发现由虫草属真菌Cordyceps寄 (Berk.) Saccardo(1878)寄生在鳞翅目、蝙蝠蛾科、蝠蛾属 生于昆虫、蜘蛛和其他生物长出子实体的虫草种类达 Hepialus 昆虫幼虫体产生的子座及幼虫尸体的复合体，它 450 多种，其中我国已记录130多种[7] 。中国传统的中医 是一种传统的名贵滋补中药材，与天然人参、鹿茸并列为 药学所指的冬虫夏草，是特指仅分布于我国青藏高原及 三大滋补品[1-3] 。冬虫夏草主要分布于我国西藏、青海、 边缘地区高寒草甸中的、具有特殊药用功效的中华虫草