应用gibsonassembly方法构建植物表达载体-华南农业大学学报.pdfVIP

　华南农业大学学报　２０１４，３５（５）：１１２１１６ ｈｔｔｐ： ｘｕｅｂａｏ．ｓｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ ∥ 　　　　　　　　　　 　ＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｄｏｉ：１０．７６７１／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１４１１Ｘ．２０１４．０５．０２０　 戢志呈，江雁翔，刘耀光，等．应用ＧｉｂｓｏｎＡｓｓｅｍｂｌｙ方法构建植物表达载体［Ｊ］．华南农业大学学报，２０１４，３５（５）：１１２１１６． 应用ＧｉｂｓｏｎＡｓｓｅｍｂｌｙ方法构建植物表达载体 戢志呈，江雁翔，刘耀光，张群宇 （亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室／华南农业大学生命科学学院，广东广州５１０６４２） 摘要：【目的】构建方便快捷的植物表达载体．【方法】应用Ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌｉｎｖｉｔｒｏｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｏｒ“ＧｉｂｓｏｎＡｓｓｅｍ ｂｌｙ”方法设计包含片段间２０～２５ｂｐ互补重叠序列的引物，通过ＰＣＲ扩增出带有首尾重叠的目的ＤＮＡ片段，可将１ 个或多个片段和线性化的载体一步组装成表达载体．【结果和结论】利用该方法快速构建了多个水稻基因的全长 以及部分缺失编码区表达载体．此外，还通过对 ＧｉｂｓｏｎＡｓｓｅｍｂｌｙ连接产物进行ＰＣＲ扩增后再连接到载体，提高多 ＤＮＡ片段组装的效率．本方法不受目的片段内部限制性酶切位点的限制，可广泛应用于各种载体的构建． 关键词：ＧｉｂｓｏｎＡｓｓｅｍｂｌｙ；体外重组；植物表达载体构建 中图分类号：Ｑ７５４　　　　　　文献标志码：Ａ　　　　　文章编号：１００１４１１Ｘ（２０１４）０５０１１２０５ ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＧｉｂｓｏｎＡｓｓｅｍｂｌｙｍｅｔｈｏｄｆｏｒｐｌａｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ＪＩＺｈｉｃｈｅｎｇ，ＪＩＡＮＧＹａｎｘｉａｎｇ，ＬＩＵＹａｏｇｕａｎｇ，ＺＨＡＮＧＱｕｎｙｕ （ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＳｕｂｔｒｏｐｉｃａｌＡｇｒｏｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓＣｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎａｎｄＵｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ／Ｃｏｌｌｅｇｅｏｆ ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６４２，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔａｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔａｎｄｅｆｆｉｃｉｅｎｔｐｌａｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｓ．【Ｍｅｔｈｏｄ】Ｇｉｂ ｓｏｎｅｔａｌｄｅｖｅｌｏｐｅｄａｎｉｓｏｔｈｅｒｍａｌｉｎｖｉｔｒｏｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｏｒＧｉｂｓｏｎＡｓｓｅｍｂｌｙｆｏｒｌｉｇａｔｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅ ＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔｓ．ＴｈｅｐｒｉｍｅｒｓｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄｔｏａｍｐｌｉｆｙｔａｒｇｅｔＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｓｔｈａｔｃｏｎｔａｉｎｅｄ２０－２５ｂｐｏ ｖｅｒｌａｐｐｉｎｇｅｎｄｓ．ＴｈｅｔａｒｇｅｔＤＮＡｓｅｇｍｅｎｔｓ，ｌｉｎｅａｒｉｚｅｄｖｅｃｔｏｒａｎｄｔｈｅｅｎｚｙｍｅｍｉｘｔｕｒｅｗｅｒｅｍｉｘｅｄｉｎｏｎｅ ｔｕｂｅｔｏｐｅｒｆｏｒｍｔｈｅａｓｓｅｍｂｌｙｒｅａｃｔｉｏｎ．【Ｒｅｓｕｌｔａｎｄｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ｕｓｉｎｇｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄ，ｓｅｖｅｒａｌｖｅｃｔｏｒｓｆｏｒｅｘ ｐｒｅｓｓｉｎｇｒｉｃｅｇｅｎｅｓｗｅｒｅａｓｓｅｍｂｌｅｄ．Ｔｏｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｆｏｒｃｌｏｎｉｎｇｍｕｌｔｉｐｌｅｆｒａｇｍｅｎｔｓ，ｔｈｅａｓｓｅｍ ｂｌｅｄｐｒｉｍａｒｙｐｒｏｄｕｃｔｓｂｙＰＣＲｗｅｒｅａｍｐｌｉｆｉｅｄａｎｄｔｈｅｎｌｉｇａｔｅｄｉｎｔｏｔｈｅｖｅｃｔｏｒ．ＴｈｅＧｉｂｓｏｎＡｓｓｅｍｂｌｙ ｍｅｔｈｏｄｉｓｆａｓｔｅｒａｎｄｓｉｍｐｌｅｒｗｉｔｈｏｕｔ