口蹄疫病毒3ABC基因截短体在毕赤酵母中表达及鉴定.pdfVIP

第六扶垒国会员代表大会暨第11次学术研讨会 3讨论 3．1 VPl蛋白的抗原性 研究表明。O型FMDV有五个中和性抗原位点，其中有3个位于VPI上，特别是抗原位点1．它由 和1208的改变会导致抗原位点l和单克隆抗原反应性的改变。虽然由于G—H环摆动不定，在X射线衍射 时无法确定其三维空间位置，但它的抗原性是明确的。抗原位点3位于病毒粒子表面五重轴周围VPl蛋白 氨基酸为1149。虽然抗原位点5和抗原位点1均位于VPl的G．H环上，但两个位点无关联，均是独立的 位点16Jo 因此，VPI蛋白是诱导产生中和抗体的主要成分，是最重要的抗原位点以及抗原变异的关键，因此， 多年来，在FMD分子流行病学调查、疫源的追踪、毒株分型、基因工程苗的研制、诊断方法的建立等领 域，VPl基因均得到众多研究人员的关注。本研究中用高效的原核表达系统表达了VPI蛋白，制备了含有 多抗原位点的口蹄疫VPI蛋白。并用纯化的蛋白免疫BALB／C小鼠获得很高的免疫效价，制备了具有高亲 和力的单克隆抗体，为建立O型FMDV诊断方法奠定了坚实的基础。 3．2抗原识别位点分析 在抗体叠加实验中，当两两抗体叠加的AI值大于10％时，表明这两种抗体所识别的抗原位点不同口l。 后的AI值分别为45．4％和49．5％，I C8与其它两株单克隆抗体叠加后AI值均大于35％，远大于10％，这 表明它与另外两株单抗针对的抗原位点不同。此结果与单克隆抗体亚类的鉴定结果一致，由于Ic8属于 位点基本一致，而且IIF9的识别位点大，IIIF9的识别位点在I【F9的识别位点之内。 参考文献略 口蹄疫病毒3ABC基因截短体在毕赤酵母中表达及鉴定 郑敏1～，金宁一，鲁会军。，李昌‘，马鸣潇1 (1军事医学科学院1l所，长春吉林130062， 2广西壮族自治区兽医防疫检疫站南宁，广西，530001) blot鉴定。 h 结果表明，重组菌株成功分泌表达了分子量大小为40kO，且具有免疫反应活性的目的蛋白；表达嚣在96 达到最高峰，占分泌总蛋白的18％。从而为进一步研制12t蹄疫免疫和感染动物鉴别诊断试剂奠定了基础。 关键词口蹄疫病毒，3ABC基因，毕办酵母，分泌表达，诊断抗原 口蹄疫(Foot-and-Mouth disease。FMD)是由121蹄疫病毒(Foot-and．Mouthdiseasevirus，FMDV)引 起偶蹄动物的最烈性传染病之一。与发达国家通常采取的扑杀政策不同，发展中国家普遍采用免疫的方法 来控制该病。因此，如何快速、可靠地区分免疫动物和感染动物对于口蹄疫的防制以及国际贸易尤为重要。 947 牛羊传染病 3B的血清抗体水平可以作为区分免疫动物和感染动物的指标‘1，”。为了提高检测方法的特异性．Shen等【31 利用合成的一系列短肽进行筛选，从2C、3ABC鉴定出12个可以诱导产生抗体的肽段，并发现这些肽段 测抗原的候选基因。 毕赤酵母表达系统是当前成熟的真核表达系统之一，具有表达量高、稳定性好、便丁高密度发酵、适 度糖基化以及表达产物生物活性好等优点，在基因工程疫苗及药物的研制中显示山其特有的优越性。本研 试剂盒奠定了基础。 ． 1材料和方法 1．1 茵种、载体和酵母表达系统试剂 JMl09本室保存。携带FMDV 说明书配制。 1．2工具酶和主要试剂限制性内切酶 reagent、 3ABC蛋白兔血清、 FMDV感染豚鼠血清、FMD