Wnt通路调控记忆性T细胞的增殖活化.pdfVIP

细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmuno1)2016，32(12 1595 · 论著 · 文章编号：1007—8738(2016)12—1595—05 Wnt通路调控记忆性 T细胞的增殖活化 罗蕾，罗光恒，方茜，黄山，陈辉 (贵州省人民医院科教处循证医学科，贵州贵阳550002) [摘 要] 目的 探讨wnt通路在记忆性T细胞(TM)增殖活化中发挥的调控作用。方法 建立同种异体 (BALB／c-C57BL／6) 小 鼠皮肤移植模型，采用免疫磁珠方法分选培养C57BL／6小鼠未成熟树突状细胞(imDC)、成熟树突状细胞 (mDC)和TM，流式 细胞术鉴定。在96孔板或Transwell 中用 imDC和负载BALB／c小 鼠抗原的mDC与TM进行混合淋巴细胞反应 (MLR)。氚标 记的胸腺嘧啶核苷(H．TdR)检测 TM的增殖情况。ELISA检测培养上清中自细胞介素2(IL-2)、IL一10、 干扰素(IFN一)的水 平。实时定量PCR检测 imDC和mDC中Wnt基因的表达情况。双荧光素酶报告基因检测MLR中TM的B联蛋白／T细胞因子 (B．catenin／TCF)信号通路转录活性。结果 与对照组相比，在96孔板中负载BALB／c小鼠抗原的mDC显著诱导TM的增殖， 上调IL-2和IFN一^y，下调IL．10的表达。mDC中wnt3a和Wnt5a的mRNA表达水平显著高于imDC。mDC与TM共培养可显著 增强TM的13-catenin／TCF信号通路转录活性。而在Transwell 中培养的细胞基本未见细胞增殖。结论 负载供者抗原的受者 小鼠mDC可通过直接接触的方式有效激活受者效应型TM的增殖，Wnt通路的13一catenin／TCF转录激活可能是介导TM活化增 殖的重要信号通路。 [关键词】树突状细胞；记忆性T细胞；Wnt；B联蛋白／T细胞因子(13-catenin／TCF)信号通路 [中图分类号]R392．1，Q253 [文献标志码]A TheregulatoryroleofW ntsignalingpathwayintheproliferationandactivationof memoryT cells LUOLei，LUOGuangheng，FANGQian，HUANGShan，CHENHui Evidence—basedMedicineSection，DepartmentofResearchandEducation，GuizhouProvincePeople’sHospital，Guiyang550002，China Correspondingauthor，E—mail：huichen7710@hotmail．corn lAbstractj 0bjective TostudytheregulatoryeffectofWntsignalingpathwayontheactivationandproliferationofmemoryT cells(TMs)．Methods Weestablishedthemousemodelofskinallog transplantation (BALB／c-057BL／6)，andthenwe sortedandculturedimmaturedendriticcells(imDCs)．maturedendriticcells(mDCs)andTMsfr0m theC57BL／6miceby immunomagneticbeadcelIsorting．The imDCsormDCsloadingantigensfrom BALB／cmicewereco-culturedwithTMSina 96-welIplateorTranswell…。plate (MLR)．The H-TdR wasusedto detect the proliferationofTMs．In the co-culture supernatants．JL-2．JL一10andJFN-weredetectedbyELIsA．TheWntmRNA expression Ievelsjn jmDCsandmDCswere determinedbyreal-timePCR．Dual-luciferasereporterassaywasperformedtodetectthetranscrip