澳洲茄胺诱导肠癌HOT-116细胞凋亡的实验研究.pdfVIP

南京中医药大学学报 2017年 1月第 33卷第 1期 JNanjingUnivTraditChinMedVo1．33No．1Jan．2017 — 69 一 澳洲茄胺诱导肠癌 HOT一116细胞凋亡的实验研究 壮雨雯 ，周锦 勇 ，昊坚 ，刘沈林 (1．南京中医药大学第一临床医学院，江苏 南京 210023；2．南京中医药大学附属医院，江苏 南京 210029) 摘要 ：目的 通过研究中药灌肠方 中的有效成分澳洲茄胺对肠癌 HCT一116细胞凋亡及相关基 因表达 的影响，探讨澳洲茄胺 抑制肠癌细胞增殖的作用机制。方法 通过实时无标记细胞分析仪检测澳洲茄胺对 HCT一116细胞增殖 的影 响；流式细胞仪 检测 HCT一116细胞凋亡 ；qPCR法检测凋亡相关基 因Bax、Survivin的mRNA表达水平 ；Westernblot实验检测凋亡相关蛋 白 Bcl一2、Bax、Bcl—xl、Caspase一3、Caspase一8、Caspase一9、PARP以及 PI3K／Akt信号通路蛋 白PI3K、Akt表达情况 。结果 实时无 标记细胞分析检测法证实澳洲茄胺对肠癌 HCT一1l6细胞的生长有抑制作用，且随药物浓度 、给药时间的增加而增强；流式检 测发现 随药物浓度 的增加 ，其凋亡增 多；qPCR法证实澳洲茄胺 能上调 Bax、下调 Survivin的mRNA表达；Westernblot法检测 证 实澳洲茄胺上调 Bax蛋白，促进 Caspase一3、Caspase一8、Caspase一9、PARP蛋 白活化 ，下调 Bcl一2、Bcl—x1蛋 白表 达 ，升 高 Bax／ Bel一2表达 比值 ，并且抑制 PI3K、Akt蛋白活化。结论 澳洲茄胺抑制肠癌 HCT一116细胞增殖 ，通过抑制 PI3K／Akt信号通路 及调控 Caspase家族 、Bcl一2家族 、Survivin、PARP的表达 ，诱导细胞凋亡，对凋亡的2条途径均有作用 ，即线粒体途径和死亡受 体途径 。 关键词 ：澳洲茄胺 ；肠癌 ；细胞凋亡；中药灌肠 中图号：R285．5 文献标志码 ：A 文章编号：1672—0482(2017)O1—0069—05 DOI：10．14148／．issn．1672—0482．2016．0069 StudyonApoptosisM echanism ofHumanColonCancerCellLinesHCT一116InducedbySolasodine ZHUANG Yu—wen ，ZHOUJin—yong ，W 【，Jian。，LIUShen—lin。 (1．TheFirstClinicalMedicalCollege，NanjingUniversityofChineseMedicine，Nanjing，210023，China 2．TheAffilia tedHospitalofNanjingUniversityofChineseMedicine，Nanjing，210029，China) ABSTRACT：OBJECTIVE ToexploretheeffectsofSolasodineontheapoptosisofhumancoloncancercelllineHCT一116and theexpressionofassociatedgenes．andtoinvestigatethemechnism oftheinhibitionofHCT一116cellsproliferation．METHODS Aftertreatment，theinhibitoryeffectofHCT一116cellproliferationwasdetermined byRealtimenon—labelcellanalyzer． Flow cytometrywasemployedtodetectcellapoptosis．TheqPCR methodwasusedtodeterminethemRNA levelsofBaxand Survivin．Protein levelsofBci一2，Bax，Bcl—xl，Caspase一3，Caspase一8，Caspase一9，PARP，PI3K andAktweredeterminedby W esternblot．RESULTS Realtimenon—labe1cel1analysisresultshowedthatSolasodineinhibi