巴戟天-牛膝醇提物对SD大鼠软骨细胞G_（1S）周期蛋白与基因表达影响的实验研究.pdfVIP

风湿病与关节炎 2017年2月 第6卷第2期 RheumatismandArthritisFebruary2017Vo1．6No．2 5· 基础研究 · 巴戟天一牛膝醇提物对 SD大鼠软骨细胞G 周期蛋白 与基因表达影响的实验研究 吴子健 ，吴桂玲2，陈达婷 ，苏 澜 ，陈春蓉 ，叶锦霞 ，洪振强 【摘 要 】目的：探究巴戟天一牛膝醇提物 (M-AAE)对体外培养的SD大鼠软骨细胞 G 周期蛋 白与mRNA含量表达的影响，为其防治骨关节炎的临床应用提供依据。方法：①用乙醇加热回流法获得 其醇提物成分；采用机械一酶消化法分离 SD大鼠膝关节处的关节软骨 ，建立体外培养细胞模型并进行鉴 定；②MTT法检测M．AAE对软骨细胞增殖特性的影响，使用倒置相差显微镜镜下观察软骨细胞状态； ③PCR、Westernblot法分别检测体外培养大 鼠软骨细胞经M-AAE的0，75，150，300gg·mL DMEM 溶液干预48h后的mRNA、蛋 白含量的表达。结果：①软骨细胞经 Ⅱ型胶原法染色后，阳性对照组胞浆 区域浸染为棕黄色 ；②经MTT检测 M—AAE对软骨细胞增殖具有一定的时效一量效关系，其最佳干预时 间和浓度分别为48h和 150嵋 ·mL～；③M．AAE干预软骨细胞后，各加药组细胞周期蛋白依赖性激酶一4 (CDK4)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的mRNA与蛋白含量的表达量均明显高于0gg·mL 组 ， 其 中以 150Pg ·mL 组的表达量最高 (PO．O1)，75 ·mL 组和300 ·mL 组在CDK4及Cyclin D1mRNA上 比较 ，其表达量差异无统计学意义 (尸0．05)。结论：M-AEE可上调CDK4、CyclinD1 mRNA及蛋白表达，对 SD大鼠软骨细胞具有一定的促增殖作用。 【关键词】 骨关节炎；巴戟天；牛膝；醇提物；软骨细胞；增殖；大鼠 doi：10．39694．issn．2095．4174．2017．02．001 An ExperimentalStudyontheEffectofMorinda—AchyranthesAlcoholExtractontheExpressionofGl／s CyclinandGeneinCartilageCellsofSD Rats WUZi-jian， Gui-ling,CHENDa-ting,SULan，CHENChun-rong,YEJin-xia,HONGZhen-qiang 【ABSTRACT】objective：ToexploretheeffectofMorinda—AchyranthesAlcoholExtract(M．AAE)on theexpressionofGl／scyclinandthecontentofmRNA incartilagecellsofSD rats，providingthebasisforclinical applicationinthepreventionandtreatmentofosteoarthritis．Methods：① Theethanolrefluxingmethodwasused toobtainthealcoholextractcomponentsandthemechanical—enzymedigestionmethodwasusedtoseparate articularca~ilagefromSDratskneejointstoestablishmodelsculturingcellsinvirtoandidentifythem；② The MTTmethodwasusedtostudytheeffectofM —AAE onchondrocyteproliferationandtheinvertedphaseconrtast microscopewasusedtoobservethestateofcartilagecells；⑧ ThePCRandWesternblotmethodswereusedto detecttheexpressionofmRNA andtheproteincontentincartilagecellsofSD ratsafter48hintervention respectivelywith0，75，150，300 ·m