空肠弯曲杆菌ERIC-PCR分型技术研究.pdfVIP

2013年第 3O卷第 1O期 空肠弯曲杆菌ERIC—PCR分型技术研究 唐梦君，高玉时，张小燕，陆俊贤，施祖灏，唐修君，陈大伟 (农业部家禽品质监督检验测试中心，中国农业科学院家禽研究所，江苏扬州 225125) 摘 要：目的 建立空肠弯曲杆菌肠杆菌科基 因问重复一致序列PCR (ERIC—PCR)的分子分型技术，快速分析 空肠弯曲杆菌指纹谱 。方法 本研究提取空肠弯曲杆菌ATCC33560的基因组DNA作为模板，采用对优化项 目设 置梯度其它条件不变的方法，对ERIC—PCR反应中的模板量、引物浓度和退火温度等进行优化，建立空肠弯曲 杆菌的ERIC．PCR分型技术，并采用该技术对 20株空肠弯曲杆菌的指纹图谱进行 了分析。结果 ERIC—PCR反应 体系中DNA模板量96ng2／5pL，ERIC1、ERIC2引物浓度各0．8~molL／，退火温度40~C时，指纹图谱条带清晰、 明亮；20株空肠弯曲杆菌临床分离株ERIC—PCR指纹图谱差异较大，可在 160bp~32000bp范围内出现2条～13 条条带，分为l4型。结论 研究显示成功建立了空肠弯曲杆菌ERIC-PCR指纹图谱分型技术，应用该方法可从 分子水平上对空肠弯曲杆菌基因组DNA进行快速指纹图谱分析，具有简便和快速等优点，能够为空肠弯曲杆菌 流行病学调查提供科学依据。 关键词：空肠弯曲杆菌；ERIC—PCR；分型 中图分类号：S852．61 文献标识码：A 文章编号：1005—944X (2013)10—0057—04 StudyOilconstructionandapplicationofERIC-PCR methodfortyping Campylobacterjejuni TangMengjun，GaoYushi，ZhangXiaoyan，LuJunxian，ShiZuhao，TangXiujun，ChenDawei (MOAPoultryQualityInspectionCenter，PoultryResearchInsitute， ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Yangzhou，Jiangsu225125，China) Abstract：ObjectiveTogenerateanefficiententerobacterialrepetitiveintergenicconsensussequence (ERIC—PCR) typingandanalyzemoleculartypeofdifferentfood—borneCampylobacterjejuni．MethodGenomicDNAofCampylo— bacterjejunireferencestrainATCC33560wasusedasthetemplateforPCR．TargetsequencesinCampylobacterjejuni genomicDNA wereamplifiedwiththeprimersdesignedaccordingtothereference．Toobtainoptimum fingerprint maps，templateandprimerconcentrationofthereactionsystem andannealingtemperatureofPCR，thefactorstobe optimizedweredesignedindifferentconcentrationgradsandotherfactorswerefixed．Then20Campylobacterjejuni isolateswereclassifiedbyPCR．ResultTheoptimalconcentrationoftemplateDNA was96ng／25~tL，theconcenrtation ofprimerswas0．8gmol／LeachprimerandannealingtemperatureofPCR was40℃ ．TheERIC—PCRfingeprrintmaps ofdifferentisolateswerediffe