五味子醇提取物减轻丙戊酸钠肝毒性和协同抗癫痫作用探究.docVIP

五味子醇提取物减轻丙戊酸钠肝毒性和协同抗癫痫作用探究[摘要] 目的 研究五味子醇提取物减轻丙戊酸钠所致肝损伤的作用及协同抗癫痫作用。 方法 第一部分实验动物随机分为：空白对照组，模型组，五味子醇提取物低剂量组，五味子醇提取物高剂量组。连续给药14 d后检测动物血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT），天冬氨酸氨基转移酶（AST）含量。酶联免疫吸附测定（ELISA）检测肝组织中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和超氧化歧化酶（SOD）等含量。第二部分实验动物随机分为：模型对照组，五味子醇提取物组，丙戊酸钠组，丙戊酸钠联合五味子醇提取物组。实验动物连续给药7 d后，按照经典癫痫发作行为标准评价五味子醇提取物的协同抗癫痫作用。 结果 五味子醇提取物高剂量组血清ALT、AST含量分别为（45.60±10.54）、（154.60±33.46）U/L，与模型组比较显著降低（P 100 g/L时，其毒副作用增加而药效却无明显增强[1]。尤以肝脏损伤最令人关注。肝毒性主要通过抑制糖异生、抑制β-脂酸氧化、抑制细胞色素P450等主要作用使肝酶类增加[2-3]。临床资料表明，服用丙戊酸钠的患者中15%～30%在服药后出现血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）及乳酸脱氢酶等肝酶活性的升高[4-5]。五味子是多年生落叶藤本，属木兰科，可做药用。其主要保肝成分五味子乙素（Schisandrin B，Sch B），是从五味子果仁中提取的有效成分，具有显著的肝脏保护作用，是多种保肝降酶中成药的主要成分[6]。其保肝机制多认为是通过清除自由基、诱导肝细胞色素P450从而增强肝脏的解毒功能、促进肝脏蛋白质和糖原合成、改善线粒体抗氧化状态，但是确切机制尚不明确[7-8]。另有研究数据显示五味子具有明显的镇静催眠作用，这也是其中医临床用于心悸失眠的现代理论依据。其对于改善睡眠具有显著效果且不产生药物依赖性[9]，有广泛的中枢抑制作用，并有安定药的特点[10]。因此本研究旨在探讨五味子醇提取物减轻丙戊酸钠肝毒性的作用及其机制，进一步探讨五味子醇提取物协同抗癫痫的作用，为临床癫痫病的治疗提供参考。 1 仪器与试药 1.1 仪器 半自动生化仪，型号：RT1904C。酶标定量测试仪：奥地利特TECAN公司，型号：F039003。 1.2 药品及试剂 五味子醇提取物：沈阳医学院药理教研室提供；丙戊酸钠：山东仁和堂药业有限公司，批号谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和超氧化歧化酶（SOD）的酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒：上海酶联生物科技有限公司。 1.3 动物 昆明种小鼠120只，体重25～30 g，健康，雌雄各半，由沈阳药科大学动物实验中心提供。 2 方法与结果 2.1 实验动物分组及给药方法 实验动物40只，雌雄各半，随机分成4组：空白对照组，模型组，五味子醇提取物低剂量组（五味子低剂量组），五味子醇提取物高剂量组（五味子高剂量组），每组10只。适应性喂养3 d后，给药方式：对照组给予生理盐水；模型组给予丙戊酸钠80 mg/（kg·d）（造模剂量预实验获得）；五味子醇提取物低剂量组给予丙戊酸钠同时给五味子醇提取物50 mg/（kg·d），五味子醇提取物高剂量组给予丙戊酸钠同时给五味子醇提取物100 mg/（kg·d）；连续灌胃给药14 d。实验期间各组小鼠置于安静环境分笼饲养，自由摄食饮水，每天称量体重，观察动物进食及活动情况。 2.2 血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）含量的检测 实验动物于给药后禁食12 h。眼球采血置于带抗凝剂的EP管中，检测ALT、AST指标，评价五味子醇提取物减轻丙戊酸钠的肝脏毒性作用。 2.3 ELISA检测肝组织中GSH-Px、SOD含量 取各组肝组织100 mg，加入生理盐水900 μL，机械匀浆。静置10 min后，4℃，3000 r/min，离心15 min后取上清液。制备标准曲线，检测肝组织中GSH-Px，SOD含量。 2.4 五味子醇提取物的协同抗癫痫作用 取小鼠80只，雌雄各半原则，随机分为模型对照组，五味子醇提取物组（五味子组），丙戊酸钠组，丙戊酸钠联合五味子醇提取物组（丙戊酸钠加五味子组）。按照组别给药：模型对照组给予生理盐水；五味子组给予五味子醇提取物100 mg/（kg·d）；丙戊酸钠组给予丙成酸钠80 mg/（kg·d）；丙戊酸钠加五味子组给予丙戊酸钠加五味子醇提取物100 mg/（kg·d），连续给药7 d，于第7天经腹腔注射氯化锂（127 mg/kg），24 h后注射硫酸阿托品（1 mg/kg），30 min后再注射匹罗卡品（300 mg/kg）。观察