银杏内脂B对人骨肉瘤Saos-2细胞的抑制作用研究.pdfVIP

2017年 2月第 22卷第 2期 ChineseClinicalOncology，Feb．2017，Vo1．22，N0 · 107 · 银杏 内脂 B对人骨 肉瘤 Saos．2细胞的抑制作用研究 210000 南京 南京大学医学院附属金陵医院骨科 章 磊，孙 畅，流小舟，吴苏稼，黎承军 【摘 要】 目的 探讨银杏内脂B(GB)对骨肉瘤(0s)细胞增殖、凋亡和迁移侵袭的影响以及潜在机制。方法 将人 骨肉瘤 Saos一2细胞分别在含 300、6O0和 1200i~mol／LGB的培养液中培养 24、48和72h，采用CCK-8法检测Saos-2细胞的增 殖情况 ，流式细胞仪检测Saos．2细胞凋亡率，Transwell小室迁移与侵袭实验检测GB对 Saos一2细胞迁移和侵袭能力的影响；提 取 GB处理后 Saos．2细胞的mRNA和蛋白，采用实时荧光定量PCR和Westernblotting检测Bcl一2、Bax、MMP一2和MMP一9的基 因及蛋白表达水平，Westernblotting法检测Erk和Akt磷酸化及cleaved—caspase-3水平。结果 GB能明显抑制Saos-2细胞的 增殖 ，且呈时间和浓度依赖性 ，600和 1200I~mol／LGB可诱导Saos．2细胞凋亡，GB对Saos一2细胞的迁移及侵袭的抑制作用呈 浓度依赖性；GB可升高BaxmRNA和蛋白水平，但降低Bcl-2、MMP一2和MMP一9的mRNA和蛋白水平；高浓度 GB能抑制Erk 和Akt的磷酸化且升高cleaved．caspase．3水平。结论 GB具有抑制Saos一2细胞增殖及迁移侵袭和诱导细胞凋亡作用，其机制 可能与抑制Erk和Akt磷酸化有关。 【关键词】 人骨肉瘤 Saos．2细胞； 银杏内脂B；增殖； 凋亡；侵袭 中图分类号：R738 文献标识码：A 文章编号：1009—0460(2017)02—0107—07 InhibitoryeffectofginkgolideB on humanosteosarcomaSaos-2cells ZHANGLei，SUNChang， UXiaozhou．WUS@a，LICheng]un．DepartmentofOrthopaedics，finlingHospi— tal，SchoolofMedicineofNanjingUniversity，Nanjing210000，China Correspondingauthor：LIChengjun，E—H ilqq．tom A【bstract】 ObjectiveToexploretheeffectofginkgolideB(GB)ontheproliferation，apoptosis，migrationandinvasionofOS— teosarcoma(OS)cellsaswellas thepotentialmechanisms．Methods HumanOSSaos一2cellswereincubatedwith300，600and1200 gmol／LGBfor24，48and72h．Wedetectedcellsviability，apoptosis，mirgationandinvasionwithcellcountingkit一8(CCK一8)，flow cytornetryandTranswellassay，separately．UsingtheextractionofthemRNA nadproteinofSaos·2cellspretreatedwithGB，wedetected htemRNA andproteinlevelsofBcl-2，Bax，caspase-3，MMP-2nadMMP-9byusingqunatitativereal—timePCR nadWesternblotting． ThephosphorylationofErkandAktandlevelofcleaved-caspase一3weredetectedbyWestern blotting．Results GBsignificnatlyinhibited theproliferationofSaos-2cellsinatime—naddose-dependentnlanner．GBat600nad120