考马斯亮蓝凝胶染色联合近红外成像用于双向电泳前的蛋白质定量.PDFVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2013, 35(6): 848–851 http ://www.cj DOI: 10.11844/cj cb.2013.06.0028 考马斯亮蓝凝胶染色联合近红外成像用于 双向电泳前的蛋白质定量 1,2 2 2 2 1 1,2* 曹 嵩 邓文文 朱欣婷 胡姗姗 喻 田 刘 云 1 ( 遵义医学院贵州省麻醉与器官保护基础研究重点实验室, 遵义563099; 2遵义医学院医学与生物学研究中心, 遵义563099) 摘要 双向电泳的蛋白质定量由于存在试剂兼容性的问题, 常常需要使用GE或Bio-Rad公司 专用的蛋白质定量试剂盒。这类试剂盒价格昂贵且实验操作繁琐, 亟待建立一种准确、快速且廉 价的双向电泳蛋白质样品的定量方法。不同浓度的蛋白质样品经十二烷基硫酸钠―聚丙烯酰胺凝 胶电泳(SDS)产生的蛋白质条带, 经考马斯亮蓝(CBB)染色后能被近红外光激发出不同强度 的荧光。利用这一性质, 以牛血清白蛋白(BSA)作为蛋白质定量的标准品, 使用Odyssey近红外荧光 “ ” 扫描成像系统绘制标准曲线用于双向电泳蛋白质样品的定量。实验结果表明, 使用 700 channel , 在1~ 10 μg的范围内, 蛋白量与荧光强度表现出良好的线性和可重复性。因此, 基于Odyssey近红外 成像的考染凝胶定量的方法是一种精确快速可用于双向电泳蛋白质定量的方法。 关键词 蛋白定量; 考马斯亮蓝染色; SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳; 近红外成像; 双向电泳 Protein Quantitation in Pre Two-dimensional Electrophoresis by Near Infrared Imaging of Coomassie Brilliant Blue on Gels 1,2 2 2 2 1 1,2* Cao Song , Deng Wenwen , Zhu Xinting , Hu Shanshan , Yu Tian , Liu Yun 1 ( Guizhou Key Laboratory of Fundamental Research on Anesthesiology and Organ Protection, Zunyi Medical College, 2 Zunyi 563099, China; Research Center for Medicine Biology, Zunyi Medical College, Zunyi 563099, China) Abstract Because of the incompatibility of different protein quantitation reagents, special protein quan- titation kits produced by GE or Bio-Rad with traditional methods are widely use