蛋白质一SDS一罗丹明B体系的共振光散射光谱及其分析应用.PDFVIP

维普资讯 第26卷第4期 分析试验室 V01．26．No．4 2007年4月 ChineseJournalofAnalysisLaboratory 200r7—4 蛋 白质一SDS一罗丹明B体系的 共振光散射光谱及其分析应用 陈 彪，黄承志 (西南大学化学化工学院，重庆 400715) 摘 要：研究了阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠 (SDS)，阳离子染料罗丹明 B，与蛋 白质相互作用的共振光散射 (RLS)光谱及用于蛋 白质的测定。实验表 明，在 pH4．35的酸性介质中，SDS的共振光散射强度较小，它与蛋 白质结合 后，共振光散射强度能得到增强，但加入阳离子染料罗丹明B后，共振光散射 强度显著增强。在 =332．0nnq处，△， 最大，并且增强的共振光散射信号与 蛋白质的浓度成正 比。据此建立 了一种测定蛋 白质的新方法，该方法灵敏度 高，对 HSA的检 出限达到 1．9ng／mL，线性范围为0．01～5．0~／g／mL。用于人血 清样品中蛋白质的测定，回收率为94．0％～105．5％。 关键词：共振光散射；蛋白质；阴离子表面活性剂SDS；罗丹明B 中图分类号：0657．3 文献标识码：A 文章编号：1000．o720(200r7)04．001．05 蛋 白质的定量测定是生物化学、药学、食品 据此，建立 了一种测定蛋 白质的新方法。该方法 及临床分析 中常涉及的内容，也是临床诊断疾病 灵敏度高，应用于人血清 中总蛋 白的测定，回收 及检验疾病治疗后的健康状况的重要指标，是许 率为94．0％～105．5％。 多生化药物分离提纯和质量检验中最常用的手段， 1 实验部分 有关蛋 白质的研究是 目前生命科学和化学领域中 1．1 仪器与试剂 一 个十分活跃的领域 j。共振光散射(RLs)法作 F一2500型荧光分光光度计(日本 日立公司)， 为一种新的光学分析技术，方法简单，灵敏度高， pH酸度计 (上海精密科学仪器有限公司)，MVS一1 可以用普通的荧光分光光度计测量，因此，该方 型漩涡混合器(江苏林其贝尔仪器制造有限公司)。 法得到了广泛的应用 。 直接将人血清 白蛋 白(HSA，Sigma，美国)溶 近年来，运用共振光散射技术对核酸和蛋 白 于水中配成50．0gg／mL标准溶液，置于 1～4℃冰 质等生物大分子进行定量测定的研究已有许多报 箱中保存。十二烷基硫酸钠(SDS)、罗丹明B溶液 道_】 。RLS法测定蛋 白质常用的试剂为阴离子 (1．0×10I4mol／L)。Britton．Robinson(BR)缓 冲溶 染料或者阴离子表面活性剂。而阳离子染料用于 液，1．0mol／L的 NaC1溶液。所用试剂均为分析 蛋白质的共振光散射法测定尚未见报道。本文研 纯 ，水为二次水。 究了罗丹 明B(RhodamineB，RB)与 SDS一蛋 白质 1．2 实验方法 体系的共振光散射光谱特征。实验发现，阴离子 在 10．0mL的 比色管 中依次加 入 1．0mL 表面活性剂 SDS与HSA结合后再与阳离子染料罗 pH4．35的BR缓冲溶液和一定量的蛋 白质溶液， 丹明B作用，其散射强度大大增强。并且，RLS增 再加入 1．0mL1．0×10 mol／L的SDS溶液，旋涡 强的程度与蛋 白的浓度在一定范围内呈线性关系。 混合后加入 1．0mL1．0×10 mol／L的罗丹 明B溶 收稿 日期