GRAM 细菌染色法.docVIP

改良BROWN和BRENN染色法GRAM 细菌染色 固定：10%缓冲中性福尔马林 切片：石蜡切片5μm。 液体： 改良Hucker-Conn液 结晶紫C.I.42555 0.8g 纯乙醇 8ml 草酸铵 4g 蒸馏水 392ml 用乙醇溶解结晶紫，用蒸馏水溶解草酸铵。然后将两种液体混合。过滤后使用。 改良Grams碘液 碘 2g 碘化钾 4g 蒸馏水 400ml 用少量蒸馏水溶解碘化钾（5ml左右）用少量碘化钾液溶解碘。再加入剩余蒸馏水。 纯乙醇-丙酮液 纯乙醇 50ml 丙酮 50ml 0.5%碱性复红储存液 碱性复红或副品红Pararosanilin（C.I.42500） 0.5g 蒸馏水 100ml 加热和磁力搅拌帮助溶解。 碱性复红工作液 碱性复红储存液 5ml 蒸馏水 35ml 苦味酸-丙酮液 苦味酸 0.05g 丙酮 100ml 丙酮-二甲苯液 丙酮 50ml 二甲苯 50ml 染色步骤 必要时设阳性和阴性对照片 染色步骤文字说明 必要时设阳性和阴性对照片 切片脱蜡至蒸馏水。 Hucker-Conn液2mins。 快速蒸馏水洗2次。 改良Grams碘液1min. 快速蒸馏水洗2次， 印片而不是组织切片（blot the slide but not the tissue section）。 用乙醇-丙酮液蘸浸脱色直到不往下掉蓝颜色为止。 蒸馏水冲洗2次，每次浸蘸几回（several dips in each） 碱性复红工作液30秒。 蒸馏水冲洗2次，每次浸蘸3回，印片而不是组织切片。 放入丙酮中5秒。 用苦味酸-丙酮液分化和脱色10秒。 用二甲苯-丙酮液浸蘸几次。 二甲苯透明更换4次（four changes） 合成树胶封固。 结果 革兰氏阳性菌 蓝 革兰氏阴性菌 红色 诺卡氏菌和放线菌丝 蓝色或红色 核 红色 其它组织成分 黄色 5