基于亲和素鄄生物素双夹心体系测定外源性蛋白血清动态浓度的非.pdfVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2013, 40(3): 266~272 于亲和素 生物素双夹心体系测定外源性蛋白 血清动态浓度的非抗体依赖新方法* 1) 1)** 1) 1) 2) 1) 颖欣 刘艳君 焦德龙 文李艳 徐江平 富 宁 1) 2) ( 南方医科大学免疫学教研室，广州510515； 南方医科大学药学院，广州510515) 摘要 建立一种非抗体依赖的检测外源性蛋白多肽分子代谢动力学血清浓度及动态变化的新方法 链亲和素为捕获分子，加 入待测生物素标记蛋白或合成肽，辣根过氧化物酶标记链亲和素为检测分子，构成链亲和素- 生物素标记大分子- 酶链亲和 素的双夹心体系，并进行特异性、敏感性、准确性及稳定性评价 本检测体系灵敏度高，可达0.3 125 g/L ，且可通过改 变亲和素包被浓度调整检出敏感度与检测范围 准确性回收率为97.82%～107.92%，批内、批间变异系数分别 5.76% 和 8.42% ，并成功应用在生物素标记人血清白蛋白(biotin-HSA)与生物素标记鸡卵黏蛋白(biotin-OVM) 的小鼠血清浓度动态检 测 本方法不依赖抗体与放射性核素，可望在外源性蛋白多肽大分子及其药物的体内定量检测和代谢动力学研究中广泛 应用 关键词 生物素，(链霉)亲和素，外源性蛋白，动态血清浓度 学科分类号 R969.1，R392 DOI: 10.3724/SP.J.1206.20 12.00175 外源性蛋白多肽分子的体内有效浓度动态监测 特点，亲和素- 生物素系统在分子识别、相互 对蛋白质类新药的药代动力学研究与生物大分子的 用、纯化、检测、固定、标记、病毒载体及非放射 基础研究均至关重要 其体内浓度及动态监测与传 性药物靶向系统等研究中发挥着重要 用[4-5] 但 统小分子药物不同的是，蛋白质多肽分子生物半衰 在多数情况下是将生物素标记抗体或抗原，与相应 期短、血浆浓度低(ng/L 或 g/L) 、易受机体内源性 的抗原或抗体反应后，以酶或荧光素标记亲和素 物质干扰，影响其体内定量检测和药物代谢动力学 为检测信号 而本研究利用亲和素- 生物素的结合 研究[1-2] 目前用于蛋白质多肽类生物分子及其药物 特点，建立了一种不依赖抗体、无需放射性核素标 [3] 的体内定量监测方法主要有两类：免疫学分析法 , 记、简便、新型的外源蛋白多肽分子的血清浓度动 特异性强、灵敏度高、操作相对简便，但要求必备 态检测方法，即包被亲和素- 生物素标记蛋白- 检 特异性抗体，甚至需具备能够构成双抗体夹心的抗 测亲和素的双夹心体系，简称SA 双夹心体系 体对(antibody pair) ；放射性同位素标记示踪法，也 1 材料和方法 具灵敏度高、特异性强等优点，但需要特殊的设备 [1-2] 1援1 材料 与环境条件以避免放射损伤及同位素放射性污染 . 生物素(biotin) ，亦称维生素H，分子质量约 1援1援1 试剂. Sulfo-NHS-LC-biotin(SNHSB)为Pierce 244.31 u， 为小分子 偶联在许多蛋白质多肽大 公司产品；人血清白蛋白(HSA) 、鸡卵黏蛋白 分子上，而不对其理化性质、生物学活性产生明显 (OVM)及鼠血清白蛋白(MSA) 为Sigma 公司产品； 影响 亲和素，包括源于卵清蛋白的亲和素 (avidin)和链霉菌的链