高糖对足细胞cop1表达的影响.docVIP

高糖对足细胞凋亡和COP1表达影响的研究 王晓林 甘华△ 杜晓刚 （重庆医科大学附属第一医院：肾脏内科,重庆 400016 ） 摘要:目的 探讨高糖对体外培养的小鼠肾小球足细胞凋亡和COP1（constitutive photomorphogenic 1）表达的影响。 方法 将体外培养的条件永生性小鼠足细胞株分为对照组、高糖组和甘露醇组，用流式细胞仪检测足细胞凋亡，用RT-PCR和Western blot法分别检测COP1 mRNA和蛋白表达。 结果 高糖组足细胞凋亡指数显著增加（p0.05），COP1mRNA及蛋白表达水平均明显下降（p0.05）；甘露醇组和对照组差异无显著性（P0.05）。 结论 高糖诱导足细胞凋亡可能与下调COP1表达水平有关。 关键词:高糖；足细胞；凋亡；COP1 High glucose induces podocyte apoptosis and COP1 expression change WANG Xiaolin, GAN Hua, DU Xiaogang ( Department of Nephrology, First Affiliated Hospital, Chongqing Medical University, Chongqing 400016 ) Abstract: Objective To observe the expression of podocyte apoptosis and COP1（constitutive photomorphogenic 1） by high glucose exposure in vitro. Methods Mouse podocytes of an immortalized cell line were cultured and divided into 3 groups: N group, HG group and MN group. Apoptosis was evaluated by flow cytometry. The effect of high glucose on the expression of COP1 were analyzed by RT-PCR and Western blot. Results Compared with N group, The leveel of COP1 was decreased and the podocyte apoptosis was increased. While MN and N group were not different. Conclusion Change in COP1 expression may play a critical role pathogenesis of high glucose induced podocyte apoptosis. Key words：high glucose；podocyte；apoptosis； COP1 基金项目：高等学校博士学科点专项科研基金（20070631008） 作者简介：王晓林（1980-），女，硕士，医师，主要从事肾小球疾病方面的研究。 通信作者：甘华，电话：(023Email：cqmusn4@ 糖尿病肾病（DN）是终末期肾功能衰竭的主要原因。蛋白尿不仅是DN的主要临床特征，而且是肾病进展的重要因素，与DN的严重程度密切相关。研究表明，肾小球滤过屏障的结构与功能改变，尤其是肾小球滤过屏障结构成分的足细胞在DN发生发展过程中起重要作用[1,2]。嘌呤霉素（PA）诱导足细胞凋亡时p53表达增加，用p53的抑制剂可明显减少足细胞凋亡，表明p53参与PA诱导的足细胞凋亡过程[3]；高糖环境下，氧化酶抑制剂还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶4通过上调p53的表达水平促进足细胞凋亡[4]。COP1是一种能介导p53被蛋白酶体降解的泛素连接酶[2，5]，可能与足细胞凋亡有关，而高糖环境下足细胞凋亡时COP1表达的改变及调节机制未见报道。本实验以小鼠足细胞为研究对象，观察高糖对足细胞COP1表达的影响，探讨DN时足细胞凋亡的可能机制。 1 材料与方法 1.1 主要试剂 1640培养液、优等胎牛血清（Gibco公司），重组小鼠IFN-γ、Ⅰ型胶原蛋白、D-葡萄糖（Sigma公司），胰蛋白酶、青链霉素（Hyclone公司），Annexin v-PE/7AAD细胞凋亡检测试剂盒（南京凯基生物公司），小鼠抗人COP1单克隆抗体、actin单克隆抗体（Santa Cruz公司），山羊抗小鼠二抗（碧云天生物公司），总RNA提取试剂盒、通用型RT-PCR试剂盒、DNA标准（TaKaRa公司），聚