异色瓢虫3个小分子热激蛋白序列及低温诱导表达分析-中国农业科学.pdfVIP

中国农业科学 2017,50(16):3145-3154 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2017.16.009 异色瓢虫3个小分子热激蛋白序列及低温诱导表达分析 1 2 1 1 3 3 1 1 汪慧娟 ，赵静 ，施佐堃 ，邱玲玉 ，王甦 ，张帆 ，王世贵 ，唐斌 1 2 （杭州师范大学生命与环境科学学院，杭州 310036 ； 潍坊科技学院植物病虫害研究所，山东潍坊 262700 ； 3 北京市农林科学院植物保护环境保护研究所，北京 100097 ） 摘要：【目的】异色瓢虫(Harmonia axyridis)是一种重要的捕食性天敌昆虫，广泛应用于农林害虫的生物防 治中。本研究旨在分析探索低温胁迫条件对 3 个小分子热激蛋白（small heat shock protein，sHSP）抗寒基因 相对表达量的影响，为异色瓢虫低温冷藏及其抗寒机制研究提供科学依据。【方法】在转录组获得异色瓢虫基因序 列的基础上，根据特异性引物获得 HaHSP47.74 （基因登录号：KX161871）、HaHSP21.53 （基因登录号：KX161873） 和 HaHSP21.52 （基因登录号：KX161874）基因cDNA的开放阅读框序列(open reading frame，ORF），采用实时荧 光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR，qRT-PCR）技术测定异色瓢虫3 个sHSP基因在不同发育 阶段、短时降温和短时降温后恢复处理、低温储存处理下以及不同色斑的表达水平。【结果】在不同发育阶段处理 中，HaHSP47.74 和 HaHSP21.53 在蛹期及成虫期高表达；HaHSP21.52 在 4 龄幼虫第 4 天表达量显著高于对照组。 在短时降温处理中，HaHSP47.74 在降温至 0℃和-5℃时表达量显著高于对照组；HaHSP21.53 和 HaHSP21.52 在降 温过程中表达量显著降低。在短时降温后恢复处理中，3个sHSP基因表达量无显著差异。在低温储藏条件下，实 验种群：黑底雌瓢虫 HaHSP47.74 表达水平在储存第 5 天时显著升高，黄底雌瓢虫 HaHSP47.74 在储存 5—15 d 时 表达量显著升高；黑底雌瓢虫 HaHSP21.53 在储存5—20 d 时显著性高表达，黄底雌瓢虫 HaHSP21.53 在15 d时显 著性高表达；黑底和黄底雌瓢虫 HaHSP21.52 无显著性高表达；越冬种群：黑底和黄底雌瓢虫 HaHSP47.74、 HaHSP21.53、HaHSP21.52 在低温储存中均无显著性高表达。【结论】sHSP 在异色瓢虫发育阶段可能发挥着作用。 短时降温胁迫能够诱导sHSP 基因高表达。实验种群在低温储存条件下 HaHSP47.74 和 HaHSP21.53 均出现了显著性 高表达，表明这两个基因在瓢虫受到冷驯化时起到了作用。此外，不同色斑型异色瓢虫的抗寒机制和抗寒能力有 所差异。 关键词：异色瓢虫；小分子热激蛋白；抗寒基因；低温储存；实时荧光定量PCR；基因表达 Sequence Analysis and Induced Expression of Three Novel Small Heat Shock Proteins Mediating Cold-Hardiness in Harmonia axyridis 1 2 1 1 3