单增李斯特菌Hly基因的原核表达及多克隆抗体的制备-论文.pdfVIP

－ 江西农业大学学报　 ２０１７，３９（１）：１７５ １８１ ｈｔｔｐ：／ ／ ｘｕｅｂａｏ．ｊｘａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ Ａｃｔａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓＪｉａｎｇｘｉｅｎｓｉｓ ＤＯＩ：１０．１３８３６／ ｊ．ｊｊａｕ．２０１７０２３ － 洪伟鸣，宋亮，左伟勇．单增李斯特菌Ｈｌｙ基因的原核表达及多克隆抗体的制备［Ｊ］．江西农业大学学报，２０１７，３９（１）：１７５ １８１． 单增李斯特菌Ｈｌｙ 基因的原核表达 及多克隆抗体的制备 洪伟鸣，宋　 亮，左伟勇∗ （江苏农牧科技职业学院 江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室，江苏 泰州 ２２５３００） 摘要：为获得单增李斯特菌溶血素（Ｌｉｓｔｅｒｉｏｌｙｓｉｏｎｏ，ＬＬＯ）蛋白及其多克隆抗体。 根据单增李斯特菌溶血素蛋白 － 的基因Ｈｌｙ序列设计了一对特异性引物，扩增出Ｈｌｙ 基因，克隆入原核表达载体ｐＥＴ ３２ａ，并转化于大肠杆菌 － ＢＬ２１中，在诱导剂 ＩＰＴＧ 的作用下重组 ＬＬＯ 蛋白成功表达。 ＳＤＳ ＰＡＧＥ 结果表明重组蛋白分子量约为 ６９．３ ｋｕ，且主要以包涵体形式表达 ＬＬＯ蛋白。 将重组蛋白纯化后免疫新西兰大白兔，获得兔抗 ＬＬＯ抗体。 － Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测到一条约６９．３ ｋｕ 的特异性条带，表明该抗体具有较强的特异性。 单增李斯特菌溶血素基因 Ｈｌｙ在大肠杆菌中已成功表达，且制备的多克隆抗体可用于ＬＬＯ蛋白的检测。 关键词：单增李斯特菌；ＬＬＯ蛋白；原核表达；多克隆抗体 ＋ － － － 中图分类号：Ｑ９３９．１４ ９　 　 文献标志码：Ａ　 　 文章编号：１０００ ２２８６（２０１７）０１ ０１７５ ０７ Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｈｌｙ Ｇｅｎｅ ｏｆ Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｔｓ Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ＨＯＮＧ Ｗｅｉ⁃ｍｉｎｇ，ＳＯＮＧ Ｌｉａｎｇ，ＺＵＯ Ｗｅｉ⁃ｙｏｎｇ∗ （Ｊｉａｎｇｓｕ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃ Ｄｒｕｇ，Ｊｉａｎｇｓｕ Ａｇｒｉ⁃ａｎｉｍａｌ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｔａｉｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ ２２５３００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔａｃｔ：Ｔｏ ｏｂｔａｉｎ ＬＬＯ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｉｔｓｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｏｆＬｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ．Ｈｌｙ ｇｅｎｅｆｒｏｍＬｉｓｔｅ⁃ ｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ｗａｓ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｅｄ ｂｙ ＰＣＲ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｐｒｉｍｅｒｓｄｅｓｉｇｎｅｄ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅＨｌｙ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｎ ＧｅｎＢａｎｋ．Ｐｕｒｉｆｉｅｄ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗｅｒｅ ｄｉｇｅｓ