临床微生物SOP-肠球菌属检验标准操作规程.docVIP

1.概述 肠球菌属包括粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌、类鸟肠球菌、绵子糖肠球菌等21个种。 2.标本类型 血液、尿液、痰、穿刺液、脓液等标本。 3.鉴定 3.1形态与染色 革兰阳性球菌，单个、成双或短链排列。 3.2 培养特性 在血琼脂平板上35℃培养18～24小时，形成较小、灰白色，有α或β溶血环的菌落。在麦康凯琼脂平板上形成较小、干燥、粉红色菌落。 3.3 生化反应 触酶试验阴性，分解甘露醇，胆汁七叶苷试验阳性，在含6.5%氯化钠的肉汤中生长，多数菌株PYR试验阳性，对杆菌肽耐药。 3.4 鉴别要点 3.4.1 本菌属特征 革兰阳性球菌，触酶试验阴性，在6.5%氯化钠中生长，胆汁七叶苷试验阳性，45℃中生长。 3.4.2 与链球菌属和乳球菌属的鉴别 肠球菌属能在pH9.6肉汤和45℃中生长，胆汁七叶苷和盐耐受试验阳性，而链球菌属和乳球菌属则相反。 3.4.3 粪肠球菌与屎肠球菌、鸟肠球菌的鉴别 粪肠球菌不分解L-阿拉伯糖，分解山梨醇。屎肠球菌能分解L-阿拉伯糖，不分解山梨醇。鸟肠球菌分解L-阿拉伯糖、山梨醇。 3.5操作步骤 3.5.1 涂片、染色 观察菌落特征，挑取可疑菌落，涂片染色镜检。 3.5.2 触媒试验 参见《触媒试验标准操作规程》 3.5.3 鉴定 从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。 4.药敏 参见《抗菌药物敏感试验标准操作规程》及CLSI最新版本文件。 5.质量控制 参见《质量管理程序》。 6.检验结果解释与分析 在β-内酰胺酶阴性肠球菌中，氨苄西林药敏试验可预测阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等敏感性。青霉素药敏试验可预测氨苄西林、阿莫西林、氨苄西林-舒巴坦、阿莫西林-克拉维酸、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等药敏结果。粪肠球菌中氨苄西林药敏结果可预测亚胺培南的药敏结果。对于血培养和脑脊液培养分离的肠球菌，需做β-内酰胺酶检测，若β-内酰胺酶阳性，则对氨基青霉素、羧基青霉素和脲基青霉素均耐药。为耐万古霉素肠球菌（VRE）加做氯霉素、红霉素、四环素和利福平药敏试验，根据结果进行治疗。氨基糖苷类高水平耐药株HLAR可用庆大霉素120 μg／片和链霉素300μg／片纸片筛选，无抑菌环为耐药，抑菌环≥10 mm为非HLAR，对于抑菌环在7～9 mm之间的菌株需用稀释法确认。对于肠球菌属，头孢菌素类、氨基糖苷类（仅筛选高水平耐药性）、甲氧苄啶和克林霉素在体外可能有活性（敏感），但在临床上耐药，所以不能报告肠球菌对这些药物敏感。 7.临床意义 粪肠球菌和屎肠球菌主要引起医院感染，最常见为尿道感染（大部分与尿道器械操作、导尿等有关），其次为腹部和盆腔等部位的创伤和外科术后感染。近年来，肠球菌属氨苄西林耐药株和庆大霉素高耐药株逐渐增多，耐万古霉素的肠球菌国外也有较多报道，已使肠球菌所致重症感染的治疗成为临床棘手的问题。 8.鉴定流程（如下图） 参考文献 [1]中国合格评定国家认可委员会．CNAS-GL23:2008医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的指南．2008 [2]周庭银编著．临床微生物学诊断与图解．第二版．上海：上海科学技术出版 社，2007 [3]叶应妩，王毓三，申子瑜主编．全国临床检验操作规程．第三版．南京：东南大学出版社，2006 编写人签名 复审人签名 审批人签名 生效日期 姓 名：XX 编写日期:2011-05 姓 名：XXX 复审日期：2011-06 姓 名：XXX 批准日期：2011-06 2011-07 XXXX医院检验科 微生物实验室 肠球菌属检验标准操作规程 编号：MYCH/ 版本：第1版 第0次修改 页数：第 1 页 共 3 页 肠球菌属检验标准操作规程 菌落观察：较小、灰白色、α或γ溶血 涂片染色：G+球菌，单个、成双或短链排列 触媒试验- +精氨酸- +绵子糖- +阿拉伯糖- 异味肠球菌 +甘露醇- +色素- 屎肠球菌 母鸡肠球菌 +动力- +阿拉伯糖- 绵子糖肠球菌 鸟肠球菌 铅黄肠球菌 +动力- 粪肠球菌 +丙氨酸- +蔗糖- 粪变种 +丙酮酸- 孤立肠球菌 曼特肠球菌 肠道肠球菌 坚韧肠球菌