临床微生物SOP-链球菌属检验标准操作规程.docVIP

1.概述 链球菌属是一群触酶试验阴性、呈链状排列的革兰阳性球菌。该菌属种类繁多，目前临床上仍沿用Lancefield血清学方法进行分群（A、B、C、D、F、G等1 8个群），或根据溶血现象（β溶血，α溶血或草绿色溶血、γ溶血或不溶血）进行分类。化脓性链球菌是临床上最重要的链球菌，属A群、β溶血的链球菌。 2.标本类型 血液、尿液、痰、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。 3.鉴定 3.1形态与染色 革兰阳性球菌，固体培养基上呈单个或成双排列，较少呈链状排列，肉汤培养基中呈长链状排列，肺炎链球菌呈矛头状，成双或链状排列。 3.2培养特性 在血琼脂平板上菌落可出现三种溶血反应：α溶血周围有灰绿色的狭窄溶血环；β溶血周围有明显较大的完全透明环；γ溶血（不溶血性）无异常变化。肺炎链球菌菌落中央呈脐窝状、表面光滑、灰色、扁平，周围有草绿色α溶血环。 3.3生化反应 触酶试验阴性，对各种碳水化合物的分解因菌种而异，链球菌不被胆汁溶解。肺炎链球菌胆盐溶菌试验阳性，Optochin试验敏感( 抑菌环14 mm)。 3.4鉴定要点 3.4.1 本菌属特征 革兰阳性球菌，单个、成双或链状排列，菌落较小，可出现β溶血、α溶血或不溶血，触酶试验阴性。 3.4.2 根据溶血及关键性试验，对链球菌进行推测性鉴定分群。 A群链球菌（化脓性链球菌）：α溶血，杆菌肽敏感。 B群链球菌（无乳链球菌）：β溶血，CAMP试验阳性，马尿酸钠试验阳性。 C群链球菌（似马链球菌、兽疫链球菌和马链球菌等）：马尿酸钠、6.5%氯化钠耐盐试验均为阴性，血清学分型、杆菌肽耐药（抑菌试验阴性）。 D群肠球菌（粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌等）：胆汁七叶苷、6.5%氯化钠耐盐试验阳性，45℃生长。现归属于肠球菌属。 C、F及G群链球菌的鉴定常需用血清学方法。 非β溶血链球菌的鉴别见表 菌 名 Optochin试验 胆汁溶菌试验 胆汁七叶苷试验 肺炎链球菌 + + - 牛链球菌 - - + 其他草绿色链球菌群 - - - 3.5 操作步骤 3.5.1 涂片、染色 观察菌落特征，挑取可疑菌落，涂片染色镜检。 3.5.2 触媒试验 参见《触媒试验标准操作规程》 3.5.3 鉴定 从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。 4.药敏 参见《抗菌药物敏感试验标准操作规程》及CLSI最新版本文件。 5.质量控制 参见《质量管理程序》。 6. 检验结果解释与分析 6.1 草绿色链球菌是人体正常菌群的一部分，通常是不致病的，只有当草绿色链球菌出现在血液等无菌液体中时，鉴定才有意义。 6.2 如果检测出链球菌对青霉素敏感，同时该菌被认为对氨苄西林、阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、阿莫西林、头孢克洛、头孢唑林、头孢地尼、头孢布坦、头孢曲松、头孢吡肟、头孢唑肟、头孢噻肟等头孢类敏感，则不必进行上述抗生素的药敏试验。如果检测出肺炎链球菌苯唑西林抑菌圈≤19 mm，应当检测青霉素、头孢噻肟和头孢曲松的MIC，因为可能发生青霉素耐药或中介现象。如果检测出链球菌对红霉素敏感或耐药，则提示该菌对克拉霉素、阿奇霉素、地 红霉素敏感或耐药。近年来青霉素耐药肺炎链球菌( PRSP)及多重耐药(MDRSP)菌株的增加，给临床治疗带来一定的困难。 7.临床意义 化脓性链球菌（A群链球菌）是引起化脓性感染的主要病原菌，致病力最强，可引起痈、蜂窝织炎、急性咽炎、丹毒、脓疱疮、猩红热、医源性伤口感染和产后感染等。此外其感染后也可发生急、慢性风湿热和急性肾小球肾炎等严重变态反应性并发症。无乳链球菌（B群）正常寄居于妇女阴道和人体肠道，带菌率可达30%左右，此菌可引起新生儿感染。肺炎链球菌存在于正常人群的口腔、鼻咽部，属正常菌群，可引起大叶性肺炎或支气管炎。草绿色链球菌是人体上呼吸道正常 菌群，通常不致病。如果在血液内或无菌体液中检出草绿色链球菌，有临床意义。 8.鉴定流程 链球菌科（链球菌属和肠球菌属）的鉴定索引 菌落观察：灰暗色、扁平、干燥，溶血或不溶血 涂片染色：GPC球菌，单个、成双或短链状排列 触酶（-） α溶血 β溶血 γ溶血 菌落、菌体特征 胆汁七叶苷 胆汁溶菌试验 杆菌肽 CAMP 七叶苷 - + Optochin（5ug） S 黄色素 + 草链 D群 A链 马尿酸钠 胆汁七叶苷 6.5%NaCl S(溶菌,15) R + 肺链