核医学教学课件（暨南大学）第六章 体外分析技术.pptVIP

第六章 体外分析技术 全国高等学校教材 李少林 王荣福主编 《核医学》第8版p43 * 第一节 放射免疫分析 radioimmunoassay, RIA 放射免疫分析法是Yalow和Berson于1960年在研究胰岛素的时候创立的一种体外放射分析技术。 结合了放射性核素的高灵敏度和抗原抗体反应的高特异性。 Dr. Yalow * 一、基本原理 竞争抑制结合反应： 放射免疫分析是在体外条件下，由足量的非标记抗原（Ag）与定量的标记抗原（*Ag）对限量的特异性抗体（Ab）的竞争抑制结合反应。 * 基本原理 Ag-Ab + Ag *Ag Ab Ag + + *Ag-Ab + *Ag (B) (F) *Ag与Ag 免疫活性相同 *Ag＋Ag Ab Ag= * Ag , AgAb=*AgAb Ag *Ag , *AgAb (B) *Ag(F) Ag *Ag , *AgAb (B) *Ag (F) * 剂量反应曲线：标准曲线 标记物与被测物之间的函数关系可以用剂量反应曲线来表示。剂量反应曲线是用一系列标准抗原反应而绘制出来的，所以又叫标准曲线。 标准抗原(标准品)是厂家在试剂盒中提供的已知剂量的非标记抗原。 * 标准曲线的绘制方法 用一系列已知浓度的标准抗原和一定量的标记抗原在一定条件下同限量的特异性抗体进行反应； 在反应达到平衡后，利用适当的分离方法分离B和F； 分别测量B和F的放射性； 用反应变量（如B/F）作为纵坐标，反应剂量作为横坐标（即一系列标准抗原）作一条曲线，就得到不同浓度的标准抗原对反应变量的竞争抑制曲线，这就是剂量反应曲线。 * B% 标 准 曲 线 * 二、基本试剂 （一） 抗体 1、抗体的亲和力 2、抗体的特异性 3、抗体的滴度 （二）标记抗原 1、比活度 2、放射化学纯度 3、免疫活性 （三）标准抗原（标准品） （四）分离方法 1、双抗体法 2、沉淀法 3、双抗体法+沉淀法 4、吸附分离法 5、固相分离法 （五）放射性测量仪器 * 三、RIA的质量控制 一个理想的、没有误差的“完美”测定，应该是标本样品的分析物无论是在一次测定中的任何位置，无论是重复测定几次，甚至在不同实验室所测得的结果都是一样的，而且所测值就是这个样品的真值。 但是，在实际工作中，这种理想的测定是不可能达到的。 任何一种分析方法都会产生误差。 * 误差的分类和来源： 根据来源不同的误差，可以把实验中产生的误差分 为两类： 系统误差 随机误差 * 1. 系统误差： 是由于试剂、仪器或操作方法上一个固定的缺陷而造成整批结果倾向性的偏差，影响了结果的正确性。 系统误差引起的测定结果的偏差是固定的偏大或偏小。 系统误差是可以避免的。 * 2. 随机误差： 是由于实验过程中各种偶然因素造成同一样品多次测定的结果不一致。 误差的出现是随机的，与真实值的偏离是双向性的，可大可小。 随机误差无法避免。 * （二）质量控制 质量控制就是使用合适的方法以检查、表示和消除来自试剂药盒和测量体系的误差，并使这种误差降低到某一允许水平。 具体作用有： 1．检查误差的程度，决定测定结果的取舍。 2．识别误差的来源并消除其原因。 3．改进测定方法的设计以提高质量。 * RIA质量控制指标 包括实验室内部质量控制和实验室间的质量控制。 实验室内部的质量控制侧重于对检测质量的控制，保证从 样品收集到发出结果报告的整个过程中能及时发现各种误 差，并分析原因，找出纠正的方法。 质量控制的指标包括： 精密度、准确度、灵敏度、特异性、稳定性 * 第二节 免疫放射分析 immunoradiometric assay, IRMA * *Ab + Ag-*Ab + *Ab Ag （B） （F） 在体外条件下, 利用Ag与过量的*Ab的非竞争性结合反应，通过测定放射性复合物的量来计算出Ag 量的一种超微量分析技术。 一、基本原理 *