PLANTeasy 植物RNA提取试剂.pdfVIP

◆ PLANTeasy 植物RNA提取试剂 ◆ 目录号 1112 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 目录号：1112 目录编号 包装单位 111201 20ml 111202 100ml  适用范围： 适用于富含多糖、多酚植物总RNA 抽提  产品储存： 室温运输，4 ℃保存，可保存6 个月  产品介绍： PLANTeasy 试剂可从植物组织，特别是富含多酚或淀粉的植物组织中， （如马铃 薯块茎，白松松针或嫩苗，和西红柿叶等），提取高纯度的总RNA 。每100 ml 可处理 100 mg 组织200 次，处理5 g 组织4 次。  操作方法： 准备试剂：液氮，研钵，无RNase 离心管，5M NaCl，氯仿，异丙醇，75 ％乙醇， 无RNase 水。 样品处理： a. 先将无RNase 离心管置于干冰中再放入研磨好的冷冻的组织样品。 b. 准备新鲜植物组织，在液氮中研磨成粉状，如果是干种子，可在室温研磨。 c. 处理过的植物材料应一直保持置于－70℃冷冻保存，直至加入提取试剂并悬浮。 - 1 - 1. 小规模提取操作步骤：（样品0.1g ，使用小规模提取方法）： 1) 取不多于 0.1 克冷冻的研磨过的植物组织，加 0.5ml 提取试剂（4 ℃），振荡至彻 底混匀。 2) 室温放置5 分钟。注意：平放离心管，使表面积最大。 3) 室温12，000 rpm 离心1 分钟，上清转入新的无RNase 离心管。 4) 加0.1ml 5M NaCl，温和混匀。再加0.3ml 氯仿，上下颠倒混匀。 5) 4 ℃ 12 ，000 rpm 离心10 分钟，取上层水相转入新的无RNase 离心管。 如果提取富含多糖多酚的植物，可以加入0.3ml 氯仿再抽提一遍。 6) 加与所得水相等体积的异丙醇，混匀，室温放置10 分钟。 7) 4 ℃ 12 ，000 rpm 离心10 分钟。弃掉上清，注意不要倒出沉淀。加1ml 75％乙醇。 （沉淀可能很难看见，应小心操作。） 8) 4 ℃5，000 rpm 离心3 分钟。倒出液体，注意不要倒出沉淀。剩余的少量液体可 再次离心收集，然后用枪头吸出，室温晾干2-3 分钟。 9) 加50µl 无RNase 水，反复吹打混匀以充分溶解RNA 。如有絮状物，可室温12， 000 rpm 离心1 分钟，取上清转入干净的无RNase 离心管中。－70℃保存。 2. 大量提取操作步骤 （样品0.1g 到5g，使用大量提取方法）： 1) 每1 克冷冻的研磨过的植物组织，加5ml 试剂，振荡至彻底混匀。 2) 室温放置5 分钟。注意：平放离心管，使表面积最大。 3) 4 ℃ 10 ，000 rpm 离心1 分钟，上清转入新的无RNase 离心管。每10ml 上清加2ml 5M NaCl，混匀。 4) 每10ml 上清加6ml 氯仿，上下颠倒混匀。 5) 4 ℃ 10 ，000 rpm 离心15 分钟，取上层水相转入新的无RNase 离心管。 如果提取富含多糖多酚的植物，可以加入6ml 氯仿再抽提一遍。 - 2 - 6) 测量所得水相体积，加0.9 倍体积异丙醇，混匀，室温放置10 分钟。 7) 4 ℃ 10 ，000 rpm 离心15 分钟。弃掉上清，注意不要倒出沉淀。加5 －10ml 75％ 乙醇。 8) 4 ℃ 5 ，000 rpm 离心5 分钟。小心倒出液体，注意不要倒出沉淀。剩余的少量液 体可再次离心收集，然后用枪头吸出弃掉，室温晾干3-5 分钟。 9) 根据沉淀大小加无RNase 水，反复吹打混匀充分溶解RNA（如每1g 叶片可加200µl 水）。如有絮状物，可室温12 ，000 rpm 离心1 分钟，取上清转入干净的无RNase 离心管中，－70℃保存。  问题与解决方法 问题