中国田鼠卵巢细胞gpt基因自发和亚砷酸钠.PDF

遗 传 学 报，24(5):403-409,1997 ActaGeneticaSinica 中国田鼠卵巢细胞gpt基因自发和亚砷酸钠 诱发突变的分子分析 孟 紫 强 （山西大学环境生物毒理学研究室 太原 030006) Abraham W.Hsie (DepartmentofPreventiveMedicineandCommunityHealthUniversityofTexasMedicalBranch2.102 EwingHallGalvestonTX77555USA) 摘要 本文研究了亚砷酸钠对CHO-AS52细胞gpt基因的致突变作用．实验结果表明，亚砷 酸钠能诱发该基因发生突变，且其突变频率随砷浓度的增加而增高。PCR分析指出，绝大多数 亚砷酸钠诱发的CHO--AS52突变体的gpt基因完全缺失．在CHO-AS52细胞自发的、50Pmo1 IL和100iimol1L亚砷酸钠诱发的突变体中，gpt基因完全缺失者所占比率分别为36.00%, 54.72％及66.67%。对亚砷酸钠诱发的非缺失型gpt基因突变的PCR产物直接进行DNA序列 分析表明，在9个突变细胞克隆中，有2个发生移码突变，其余7个突变细胞克隆的gpt基因结 构未发现改变，碱基的改变可能发生在基因启动子区。 关键词 亚砷酸钠，基因突变，DNA序列分析，PCR,CHO,AS52 砷是一种广泛分布在自然界的类金属，也是常见的工业废物。流行病学研究表明，砷 的接触确实与人的皮肤癌、肺癌，甚至肝癌的发生有关。然而，砷引起肿瘤的机制仍未阐 明。众所周知，砷的毒性很强，它的遗传毒理学效应在不同类别的研究中也被证实。研究 指出，砷化合物能够引起DNA链断裂、姊妹染色单体交换 S（CE)及染色体畸变 C（A)，但一 般未能诱发出可测定到的基因点突变[6.［121。因此，砷被认为是辅致突变物和辅致癌物。最 近，Mooreetal{1994)发现，无机砷化合物可诱发L5178Y小鼠淋巴瘤细胞发生突变克 隆。HartmannandSpent(1994)用单细胞凝胶电泳测定技术发现高浓度的砷可引起人血 淋巴细胞DNA链断裂[3［1。本研究表明，高浓度的亚砷酸钠可诱发中国田鼠卵巢细胞 (CHO）产生抗6--A-基鸟DOR}(6-TG)的突变克隆，也可诱发该细胞黄AP吟一鸟缥岭磷酸核 糖基转移酶(gpt)基因发生缺失突变。 1材料和方法 1.1 细胞培养 本研究采用体外培养的CHO细胞的衍生细胞株AS52细胞。该细胞带 有一个从E.coli转移来的稳定的单拷贝gpt基因。在AS52细胞中，gPt基因位于第6或第 本文于1996-03-04收到，1996-06-27修回 404 遗 传 学 报 24卷 7染色体上9[]。该细胞培养在F12FCM5培养基中含（有5％热灭活胎牛血清的HamsFl2 培养液），在5%CC)Z,37℃的二氧化碳培养箱中培养4[l［。为了去除AS52细胞群中已存在的 gpt突变细胞，AS52细胞首先用MPA培养基F（12FCM5含有：250pg／ml黄嗦吟,25}g／ ml腺嚎岭核昔、50i[mol／L胸腺啼吮核昔、31,mol／L氨基碟岭和lolig／ml霉酚酸）处理 2一3天。在亚砷酸钠处理前，再将AS52细胞在F12FCM5培养液中培养2天。 1.2化学物与处理条件 实验中所用亚砷酸钠购自美国Sigma化学公司。首先将5x 105AS52细胞种植在含有5mlFl2FCM5培养液的25_CMZ塑料培养瓶中。24h以后，以不 同浓度的亚砷酸钠在37℃下处理处于对数生长斯的AS52细胞 每（培养瓶约1一1.5x106 细胞）4h。亚砷酸钠溶液均在用前以无血清F12培养液配制。处理结束后，用磷酸缓冲盐 溶液洗涤细胞3次。 1.3细胞毒测定和gpt突变克隆的选择 采用我们前已发表的方法测定亚砷酸钠的细 胞毒和致突变作用4[]［。为了测定细胞毒作用，每个处理将200个细胞培养在含有5ml F12FCM5培养液的60。 培养皿中，重复3次，培养7天后，计算克隆数。各实验组细胞