不同IBA和6-BA浓度对巴斗杏离体腋芽增殖的影响.pdf

第 31卷第 3期 淮北煤炭师范学院学报(自然科学版) V01．31 No．3 2010年 9月 JournalofHuaibeiCoalIndust~TeachersCollege(NaturalScience) Sep．2010 不同IBA和6一BA浓度对巴斗杏离体腋芽增殖的影响 杜雪玲，余如刚，宋运贤 (淮北师范大学生命科学学院，安徽 淮北 235000) 摘 要：本研究以淮北巴斗杏茎段为外植体，以MS为基本培养基，研究不同浓度 6一BA和 IBA对芽增殖的影响．结 果表明：采用 4、5月份 巴斗杏茎段，0．1％升汞灭菌时间8rain，6一BA浓度 1。0mg／mL，IBA浓度为 0．1mg／L时茎段 增殖和生长最适宜． 关键词：巴斗杏；外植体；灭菌；离体腋芽；增殖 中图分类号：S662．9 文献标识码：A 文章编号：1672—7177(2010)03—0034—03 巴斗杏，别名：大巴斗杏、黄巴斗杏，原产安徽萧县，是安徽淮北地区古老品种．至今有400余年的栽培 历史，已在国家果树种质熊岳李杏圃内保存．品种特性果实肉质细、致密、纤维少、味酸甜适 口、有香味、含有 多种氨基酸和维生素，是优 良的鲜食和加工兼用品种，并且有防癌健体的功能．但是长期以来，由于采用无 性繁殖方法，以及一些病害的发生，逐渐导致种性退化、产量和品质的下降，这是 目前生产上需要我们迫切 解决的问题．利用组织培养方法获得无毒或少毒再生植株，并在短时间内快速增殖，获得大量组培苗是解决 这些问题的公认有效途径．从所查文献资料表明，杏树的组织培养研究报道很少，覃兰英…、李梦玲 对杏茎 尖培养进行研究．根据研究发现，杏栽培品种茎段、茎尖培养较难成功，而且不同品种间差异很大．本试验以 淮北地区巴斗杏茎段为培养材料，进行离体快繁殖研究，为后期杏树品种改良奠定基础． 1 材料与方法 1．1 材料 材料来源：淮北黄里巴斗杏． 1-2 培养基及培养条件 本研究以MS为基本培养基，生长素 IBA浓度分别为0mg／mL、0．1mg／mL、0．2mg／mL，细胞分裂素 6一BA浓度分别为0、0．5mg／mL、1．0mg／mL、1．5mg／mL．培养基均附加蔗糖30．0g／L、琼脂6．0g／L．培 养温度 25±2oC，光强3000Lux，每天光照 16h． 1．3 方法 分别取不同生长时期2、3、4、5、6、7月份的巴斗杏茎段为外植体，流水冲洗 2h，然后在超净工作台上先 用70％酒精浸泡 50S，接着用无菌水冲洗 3次，再移人 0．1％的升汞中浸泡，灭菌时间分别为 4、5,6、7、8、9、 10min，然后用无菌水冲洗4～5次．在已灭菌的培养皿中剪去茎段的两端，接种在诱导出芽培养基上，进行 培养． 2 结果与分析 2．1 不同时期外植体对污染率的影响 分别选取 2、3、4、5、6、7月份的茎段作为外植体，70％酒精灭菌40s，然后在 0．1％升汞灭菌 8rain．结果 显示，2、3月份外植体污染率最高为95％，其主要原因可能2、3月份的外植体茎段内含有大量的内生菌，实 验室的一般的灭菌方法无法将其彻底根除，结果造成大量的培养基及外植体污染．4、5、6、7月份的外植体污 染率分别为5％、8％、12％、15％，而且4、5月份茎段接种后腋芽增殖较快，颜色较绿． 收稿 日期：2010一Ol一15 基金项 目：2008年度安徽省高校 自然科学研究项 目(KJ2008B230) 作者简介：杜雪玲 (1976一 )，河南扶沟人，硕士，讲师 主要从事细胞生物学方面的研究 第 3期 杜雪玲等：不同IBA和 6一BA浓度对巴斗杏离体腋芽增殖的影响 35 2．2 灭菌时间对 巴豆杏诱导发芽率的影响 以4月份巴斗杏带芽嫩茎段为外植体，用 0．1％升汞进行不同时间灭菌处理．结果表明(表 1)：外植体 的污染率随着灭菌时间的增长而下降，在4—7rain内污染率分别为6．34％、4．84％、2．17％、1．61％，8rain 后污染率为0．同时，在4—8min茎段腋芽增殖率呈上升趋势，最高达91．43％，且腋芽健壮鲜绿色，生长较 快；8min之后腋芽增殖率明显下降，部分茎段呈现黑色枯死状态，大多腋芽小且偏黄．由此可见，巴斗杏茎 段用 0．1％升汞灭菌