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雌激素对兔脊髓缺血再灌注损伤保护作用 　　[摘要] 目的 探讨雌激素对兔脊髓缺血再灌注损伤的神经保护效应。 方法 成年新西兰大白兔肾下腹主动脉钳夹20min恢复再灌注。实验分组如下：Control组（n=8）仅行肾下腹主动脉钳夹20min恢复再灌注；Sham组（n=8）行对照组操作除外肾下腹主动脉钳夹；雌激素处理组（n=8）分别在再灌注开始即刻经兔耳缘静脉给予雌激素200，400，800μg/kg。再灌注后48h进行下肢神经功能评分（Tarlov法）后处死受试动物，取脊髓行组织HE染色切片病理分析。 结果 Tarlov评分发现雌激素处理组神经功能评分明显高于control组（P0.05）。手术过程中，直肠温度保持在38.0～39.0℃。肾下腹主动脉阻闭前后股动脉压力在各组间比较，差异无统计学意义（P0.05）表1。 2.2 后肢运动功能评分 术后动物无意外死亡。再灌注48h后，对照组动物后肢运动功能评分显著低于雌激素处理组（P=0.008），E3组显著高于E1组（P=0.026），E1、E2组比较差异无统计学意义，Sham组后肢功能无障碍为4分（图1）。 2.3 病理学观察 再灌注48h后，对照组脊髓前角光镜下可见正常神经元数量明显减少，神经细胞缺血变性坏死严重，胞浆深染，有的细胞核固缩，核仁消失，细胞周围有空泡形成；正常神经元数量显著少于雌激素处理组（P=0.006）（图2）。而E3组正常运动神经元较多，胞体呈多角形，核仁清晰，胞浆中尼氏体清晰（图3）。 　　3 讨论 本试验发现：在再灌注开始即刻，经兔耳缘静脉给予雌激素200，400，800μg/kg，可剂量依赖的增加脊髓前角运动神经元数目，显著改善缺血后下肢功能障碍，减轻兔脊髓缺血再灌注损伤。 我们通过病理发现Control组脊髓前角存在大量嗜伊红染色的坏死神经元；雌激素治疗组坏死神经元明显减少。而E1，E2组脊髓前角正常运动神经元与E3组相比，差异有统计学意义，神经功能评分也出现一致的结果。推测800μg/kg体内发挥较强的生物学作用，我们参考其他文献可知临时短暂应用此剂量雌激素未发现明显的副作用，可将其作为下步深入研究雌激素作用机制的剂量。 脊髓缺血再灌注损伤的主要机制是脊髓组织缺血后三磷酸腺苷（ATP）减少，细胞膜离子泵功能衰竭，钠离子内流造成细胞水肿，溶酶体破裂引起谷氨酸等兴奋性氨基酸释放增加，大量钙离子内流造成钙超载，激活多种酶类，生成大量自由基，引起严重炎症反应，最终导致细胞组织水肿破环血管痉挛阻塞，造成组织缺血再灌注损伤[13-17]。 以往的研究发现雌激素可减轻局部炎性反应，激活抗凋亡系统。新近研究提示雌激素的神经保护可能通过线粒体途径参与。线粒体是细胞氧化磷酸化中心，是细胞能量加工厂，其功能的衰竭是细胞死亡扳机点。以往的研究发现再灌注开始后，线粒体内产生大量氧自由基，破环细胞呼吸链，造成细胞能量衰竭而致死[10]。我们研究发现雌激素治疗组缺血脊髓匀浆后检测，超氧化物歧化酶（SOD）活性明显增加，SOD作为细胞内主要的自由基清除剂和抗氧化酶，其水平的降低，提示其保护组织细胞受毒性氧自由基损伤的效能减弱[10-20]。故推测雌激素减轻兔脊髓缺血再灌注损伤与其增加SOD水平，从而清除过量的氧自由基减轻损伤，发挥其保护作用。下一步研究将从细胞，在体两个层面深入研究雌激素的保护作用与线粒体损伤的关系。 总之，雌激素可剂量依赖的减轻兔脊髓缺血再灌注损伤，增加脊髓前角运动神经元数目，显著改善缺血后下肢功能障碍。 [参考文献] [1] 阎平键，王峥，刘建光，等.依达拉奉对家兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用[J].神经损伤与功能重建，2012，7（3）：186-188. [2] 方波，赵曦，王赫，等.缺血预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤水通道蛋白-4表达的影响[J].中国组织化学与细胞化学杂志，2013，22（2）：121-125. [3] 邓姣，丁倩，谷秋寒，等.长期重复高压氧预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤的作用[C].2009国际麻醉学基础与临床研究论坛，2009：125. [4] 宋文英，陈琼，熊利泽，等.缺血后处理上调内源性抗氧化物酶活性诱导兔脊髓保护效应[J].中华医学杂志，2008，88（33）：2355-2359. [5]姚俊岩，翁浩，张兰，等.脊髓缺血再灌注损伤模型的改进及脊髓耐受缺血时限的研究[J].四川大学学报（医学版），2007，38（3）：497-500. [6] Garcia-Segura LM，Azcoitia I，DonCarlos LL.Neuroprotection by estradiol[J].Prog Neurobiol，2001，63（1）