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PON1基因多态性和原发性肝癌相关性【摘要】目的 检测原发性肝癌病人与正常人PON1基因的多态性。方法 对121例原发性肝癌病人和100正常人运用SnapShot 技术检测PON1基因（rs854552、rs662、rs757158、、rs854573、rs705382）这5个位点的表达。结果 原发性肝癌病人与正常人的PON1基因（rs854552、rs662、rs757158、、rs854573、rs705382）这5位点的表达P0.05.结论 PON1基因多态性与原发性肝癌无一定的相关性 【中图分类号】R4 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2014）02-0107-02 原发性肝癌（HCC，以下简称肝癌）是临床上最常见的恶性肿瘤之一，全球发病率逐年增长，已超过65万/年， 居于恶性肿瘤的第5位； 死亡接近62.3万/年，位居肿瘤相关死亡的第3位。HCC在我国高发，目前，我国发病人数约占全球的56%；在肿瘤相关死亡中仅次于肺癌，位居第二。因此，肝癌严重威胁我国人民健康和生命.目前已证实PON1基因M和Q等位基因的出现频率和乳腺癌发病风险呈正相关，同时表现为MM型和QQ型基因的个体更易诱发乳腺癌（参考文献1）、另有实验证明检测血清PONI的活性可以作为肺癌患者与前列腺癌患者的辅助检查项目之一（参考文献6）、也有报道显示PON1基因与2型糖尿病的发生有关（参考文献7）。而关于肝癌的研究甚少，本实验运用SnapShot 技术深入研究PON1基因多态性（rs854552、rs662、rs757158、、rs854573、rs705382）与原发性肝癌发生的相关性。 1 材料与方法 1.1 研究对象 本实验选取 2008 年至2012 年在浙江大学附属第一医院肝胆胰中心住院的手术患者，经实验室及影像学等检查，临床诊断为原发性肝癌，行原发性肝癌根治手术，所有患者皆经术后病理明确诊断为肝细胞癌，121例原发性肝细胞肝癌病人的外周血标本，其中男性73 名，女性48名，年龄28岁至71岁，平均45.3岁，HBsAg阳性115例，阴性6例；AFP阳性87例，阴性34例。对照组100例均来自2010年3月～2012年4月间，在浙江大学附属第一医院采集的体检正常人静脉血样。体检结果均正常，无肝硬化、乙肝相关病史、糖尿病等疾病，且一级亲属无HCC病史。其中男性56 名，女性44名，年龄21岁至69岁，平均39.4岁，HBsAg，AFP均阴性。研究对象均有完整的临床资料，均签署知情同意书。 1.2 DNA提取 运用Promega maxwell@16机器提取DNA，大约40 分钟后，提取DNA 程序完成。将收集管中大约210μl 的DNA 溶液转移至冻存管。冻存管在-80℃冰箱保存 1.3 PON1基因的多态性分析 运用SnapShot 技术进行PON1基因的多态性分析。 1.3.1 PCR反应体系及反应条件 反应体系：（20μl）包含1x HotStarTaq buffer， 3.0 mM Mg2+， 0.3 mM dNTP， 1 U HotStarTaq polymerase （Qiagen Inc.） 和 1 ?l 样本DNA。 反应条件：95?C 2min； 11 cycles x （94?C 20s， 65?C-0.5?C /cycle 40 s， 72 ?C 1min30s）； 24cycles x （94?C 20s， 59?C 30s， 72 ?C 1min30s）； 72?C 2 min； 4 ?C for ever 1.3.2 PCR产物纯化 在15μl PCR产物中加入5U SAP酶和2U Exonuclease I酶，37 ?C温浴1小时， 然后75?C灭活15分钟 1.3.3 SNaPshot多重单碱基延伸反应 1.3.4 延伸产物上ABI3730XL测序仪 取0.5μl 纯化后的延伸产物，与0.5μl Liz120 SIZE STANDARD， 9μl Hi-Di 混匀， 95 ?C变性5分钟后上ABI3730XL测序仪，收集的原始数据用 GeneMapper 4.1 （AppliedBiosystems Co.， Ltd.， USA） 来分析。 1.4 结果 实验结果数据显示PON1基因多态性（rs854552、rs662、rs757158、rs854573、rs705382），他们的位点等位基因频率比较差异无统计学意义（P0.05）。经这些位点的共性，特性分层后分析差异扔无统计学意义（P0.05）（表1）（表2）（表3）（表4）（表5） 1.5 讨论 对氧磷脂酶（paraoxonase，PON）是一类芳