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基于体内外相结合中药大品种二次开发物质基础探究思路 　　[摘要] 中药大品种二次开发是中药现代化、科学化、标准化进程的重要环节之一。如何准确有效地识别原方有效物质基础是二次开发中最首要的难题，同时也是中药现代化发展的瓶颈。该文在目前已有的试验方法的基础上，根据中药复方多成分、复杂作用需要综合多学科的方法与技术协同研究的思路，提出基于体内外相结合的中药大品种二次开发物质基础研究思路，认为物质基础研究需要分为识别、筛选、验证3个环节，每个环节设计相应的体内、外的研究方法相互补充、相互验证，最终筛选正确可靠的复方物质基础。该思路为中药大品种二次开发以及复方物质基础研究提供参考。 [关键词]中药大品种；二次开发；物质基础；体内、外结合；研究思路 中药大品种具有很好的临床疗效和患者认可度，在现代中医药临床中发挥了重要作用。对中药大品种进行二次开发是中药现代化、科学化、标准化进程的重要环节之一。如何准确有效地识别原方中有效物质基础并进行有效的质量控制是中药工作者所面临的最主要的难题，同时也是决定中药大品种二次开发成败的决定性因素。本文以中药体内外成分、效应有机结合为指导思想，提出基于体内外相结合的中药大品种二次开发物质基础研究思路，为中药大品种二次开发以及复方物质基础研究和复方开发提供部分参考。 1中药复方物质基础研究现状 中药复方具有君臣佐使的组方原则，其组方构成是一个具有一定层次与结构的有机整体。同时中药复方中每味药材又是由多类化学成分组成。因此，整体性和复杂性是中药复方最大的特点，同时也是物质基础研究面临的巨大难题。 目前中药复方物质基础研究方法分为传统化学成分分离法、拆方研究法、血清药理学/药物化学法、谱效关系结合法、代谢组学研究法。 1.1传统化学成分分离法 传统化学成分分离法是研究中药复方物质基础最早、最经典的方法。中药经过植物化学成分分离、纯化、结构鉴定，得到的单一化合物，辅以药理活性筛选加以确定；或者利用已有药理模型对植物化学分离中的每个部位进行活性追踪，对最终得到的化合物进行结构鉴定。袁胜浩等[1]利用硅胶、MCI和Rp-8等柱色谱方法对秋海棠科植物大半边莲的甲醇提取部位进行分离纯化，并根据理化性质和光谱数据（MS，UV，IR，1H-NMR，13C-NMR）鉴定结构。采用比浊法测定单体化合物的最小抑菌浓度（MIC）。结果从大半边莲中分离得到6个酚酸类化合物，分别鉴定为水杨酸、间羟基苯甲酸、阿魏酸、绿原酸、没食子酸和原儿茶酸。其中，水杨酸和原儿茶酸的抑菌谱最广，阿魏酸次之，间羟基苯甲酸最小；原儿茶酸的抑菌活性最强，间羟基苯甲酸最弱。 化学成分分离法成功研究了抗疟新药青蒿素，抗癌新药紫杉醇、长春新碱，治疗老年痴呆病的石杉碱甲等驰名海内外的产品。此方法可得到的结构明确、作用机制清晰的单一活性化合物。但是，此方法工作量大，成功率低，同时脱离了中医药范畴属于纯粹的天然药物化学方法。 1.2拆方研究法 拆方研究可说明中药复方的配伍组方原理及作用机制，为研制中药大品种二次开发提供可靠的依据，是目前中药复方研究中最为常用的一种方法[2]。李越峰等[3]研究四逆散拆方煎煮化学成分后发现，在配伍煎煮的过程中产生了新的成分，且成分溶出量研究表明各成分间存在明显的相互增溶作用。潘岩等[4]研究左金丸及拆方对胃溃疡大鼠胃黏膜愈合和表皮生长因子受体表达的影响，结果发现，左金丸及其拆方均有促进溃疡愈合的作用，显著性上调EGFR的表达可能是左金丸促进溃疡愈合的重要机制之一。 1.3血清药理学/药物化学法 血清药理学由日本学者20世纪80年代在对汉方的研究体系进行探讨的过程中首次提出，是为了研究中药复方而诞生的一种新的体外实验方法。中药血清药理学是采集动物给予中药或中药复方一定时间的血液，分离血清，用含有药物成分的血清进行体外细胞、亚细胞水平进行超微、生化、受体、基因等方面研究的一种实验方法。王威等[5]研究疏肝导浊方药含药血清对肝癌细胞株（HepG2）的过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARα），肝脂酶（HL）及载脂蛋白Apo B100，Apo AII，Apo CII mRNA表达的影响，结果表明，疏肝导浊方药含药血清能增加HepG2细胞PPARα，HL，ApoB100，Apo AII，Apo CII mRNA的表达，从而促进了肝细胞的脂代谢功能，这可能是疏肝导浊方药治疗脂肪肝的重要机制之一。张金艳等[6]利用含药血清研究冠心苏合丸系列组方药物血清对心肌细胞缺氧复氧损伤的影响，结果表明，冠心苏合丸系列组方对缺氧复氧心肌细胞损伤均有明显保护作用，作用机制相似；原方中青木香被土木香替换或者去掉青木香，不影响其抗缺氧复氧损伤的作用。 中药血清药理学同时也存在一定的问题：如血清自身组分