植物基因工程载体.pptVIP

名称 宿主细胞 功能元件来源 结构 插入片段容量 参考文献 酵母人工染色体(YAC) 酵母细胞 酵母染色体 线状DNA 100~2000(kb) Murry,et al.,1983 细菌人工染色体(BAC) 大肠杆菌 大肠杆菌F因子 环状质粒 350(kb) Shizuya,et al.,1992 来源于P1人工染色体(PAC) 大肠杆菌 P1噬菌体 环状质粒 300(kb) Loannon,et al.,1994 哺乳动物人工染色体(MAC) 哺乳动物细胞 哺乳动物染色体 线状DNA 10000(kb) Farr,et al.,1995 人类人工染色体(HAC) 人组织细胞 人的染色体 线状DNA 10000(kb) Harrington,et al.,1997 植物人工染色体(PAC) 植物细胞 植物染色体 线状DNA 10000(kb) In progression 人工染色体的种类和特点 植物基因工程载体 　1、 基因工程载体的命名及种类　2、 植物细胞的直接转化程序　3、 Ti质粒 4、 植物病毒载体 5、 植物病毒介导的转染程序 载体（vector）是由在细胞中能够自主复制的ＤＮＡ分子构成的一种遗传成分，通过实验手段可使其它的ＤＮＡ片段连接在它的上面，而进行复制，作为基因工程的载体。 载体 功能 克隆载体: 克隆一个基因或DNA片断 表达载体: 用于一个基因的蛋白表达 整合载体: 把一个基因插入到染色体组中 1、基因工程载体的命名及特性 基因克隆的本质是使目的基因在特定的条件下得到扩增和表达，而目的基因本身无法进行复制和表达、不易进入受体细胞、不能稳定维持，所以就必须借助于“载体”及其“寄主细胞”来实现。 作为基因克隆的载体必须具备以下特性： ⑴载体必须是复制子。 ⑵具有合适的筛选标记，便于重组子的筛选。 ⑶具备多克隆位点（MCS），便于外源基因插入。 ⑷自身分子量较小，拷贝数高。 ⑸在宿主细胞内稳定性高。 2、植物细胞的直接转化程序 枪击法 将待转化的DNA沉淀在细小金属珠的表面，用特制枪将金属珠直接打入植物细胞，枪的威力为430 m / s，植物细胞通常是胚胎细胞、玉米籽、叶子等，但进去的DNA片段整合效率极低。 电击法 将高浓度的质粒DNA加入到植物细胞的原生质体悬浮液中，混合物在 200 - 600 V / cm 的电场中处理若干秒钟，然后将原生质体在组织培养基中生长 1 - 2 周，再生出整株植物。 融合法 将外源DNA与特殊的疏水性高分子化合物混合，在水中这些疏水性化合物分子形成球状的脂质体，后者与植物细胞原生质体融合，筛选融合子，再生植物细胞壁。 所有涉及到植物原生质体的基因转化方法均存在一个难题，即：原生质体很难再生出整株植物。 花粉管导入法 将外源DNA沿着花粉管经过珠心进入尚未形成正常细胞壁的卵、合子或早期胚胎细胞中，从而实现基因的转移。 花粉管导入法的特点是直接、简便。它的受体材料为植株整体，省略了细胞组织培养的诱导和传代过程，排除了植株再生的障碍，特别适合于难以建立有效再生系统的植物。由于转化的是完整植株的卵细胞、受精卵或早期胚胎细胞，导入的DNA分子整合效率较高。 　 质粒（plasmid） 是存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA 分子。大小约为 数千碱基对。常 有1 ~ 3个抗药 性基因，以利于 筛选。 3、Ti质粒 Ti是在根瘤土壤杆菌细胞中存在的一种染色体外自主复制的环形双链DNA分子。它控制根瘤的形成，可作为基因工程的载体。 Ti质粒 Ti plasmid 为植物根癌土壤杆菌菌株中存在的质粒，其特定部位与植物核内DNA组合来表达信息，使植物细胞肿瘤化。即此质粒既有在细菌中表达的基因，又有在高等植物中表达的基因，这是很独特的。该质粒其大为90－150×106道尔顿，其与植物DNA结合的部分（称为 T－DNA）约15×106道尔顿。在此处有支配肿瘤化及维持肿瘤状态和产生opine的基因。在T－DNA以外的区域，存在着对质粒的传递性、opine的透过和分解等（在细菌中表达的性状）的基因。通过opine所诱导的接合，可被传递于土壤杆菌属（Agrobacterium）和根瘤菌属（Rhizobium）细菌。另外对于T-DNA部分从细菌细胞移于植物细胞的机制并不清楚。已知有三个类群，根据opine的种类而分别称为章鱼〔肉〕碱型、nopaline型和Agropine型。 Ti 质粒的图谱 整个质粒 160 - 240 kb 其中 T-DNA 12 - 24 kb tms 的编码产