食品中大肠菌群平板计数法不确定度的评定.docxVIP

2014年第4期质量技术监督研究NO.4.2014（总第34期）Quality and Technical SupervisionResearchGeneralNO.34食品中大肠菌群平板计数法不确定度的评定何晓玲（福建省晋江市质量计量检测所，福建 晋江 362200）摘要：采用 GB 4789.3-2010《食品安全国家标准 食品微生物学检验大肠菌群计数》第二法大肠菌群平板计数法进行检验，建立数学模型，对测量不确定度的来源进行分析，建立了简明的食品中大肠菌群平板计数法检测结果的不确定度评定方法，实验室的扩展不确定度为0.050，适用于食品中大肠菌群平板计数法检验的不确定度评定。关键词：大肠菌群；平板计数法；不确定度大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便 污染有关的细菌，大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。一切测量结果都不可避免地具有不确定度，本文根据 JJF1059.1-2012《测量不确定度评定 与表示》［1］和GB4789.3-2010《食品安全国家标准 食品微生物学检验大肠菌群计数》［2］第二法大肠菌群平板计数法，探讨对食品中大肠菌群检验不确定度及评定方法。1检验方法依据 GB 4789.3-2010《食品安全国家标准食 品微生物学检验大肠菌群计数》第二法大肠菌群平板计数法进行检验，检验程序为样品制备—10倍系列稀释—选取2～3个适宜稀释度样品匀液接种—倾注VRBA培养基—计数典型和可疑菌落—BGLB肉汤—报告结果。数学模型公式为：（1）——样品中大肠菌群数，CFU/g；——典型菌落总数，CFU；——证实试验为阳性的菌落数的百分比（阳2数学模型建立收稿日期：2014-04-22作者简介：何晓玲，女，福建省晋江市质量计量检测所性菌落数/挑取的可疑菌落数）；——稀释因子。3不确定度来源分析及评定在微生物检测中，一般认为样品中细菌分布的均匀性和重复性带来的不确定度是影响检验结 果准确度的主要原因，但是也不可忽视来源于样品状态、培养过程、计量器具、操作人员等引入的不确定度。以下结合工作实际对可能产生不确定度的因素进行具体分析。3.1均匀性引入的不确定度样品中均匀性带来的不确定度是影响检测结 果的重要原因，该实验依照 GB4789.1-2010《食品安全国家标准 食品微生物学检验总则》［3］规定，将样品充分混合后随机取样，可认为样品是均匀的，则由此所导致的不确定度可忽略不计。3.2 重复性检测引入的不确定度重复性检测带来的不确定度是影响检测结果 的重要原因，属于A类不确定度，文中对同一样 品重复测定20次，检测结果进行分析参见表1。合成标准不确定度为：（2）表120次平行测定大肠菌群的结果3.3样品制备过程中引入的不确定度样品制备过程包括称量和稀释过程，其不确定度主要是由电子天平称量（B类）、玻璃器皿（B 类）、均质器均质等引入的。入的标准不确定度为： 则，实际称量25.0g样品时，（3）（1）电子天平：所用天平最大量程为1000g，允许误差为0.1g，称取25.0g样品，按级使用的数字式仪表、测量仪器最大允许误差导致的不确定度属于均匀分布，所以由天平称量引则，实际量取225ml无菌生理盐水时，（4）（2）玻璃器皿：所用250ml无菌量筒量取225ml无菌生理盐水缓慢加入称量好的25.0g样品中，根据 JJG 196-2006［4］中规定，20℃时量出式量筒的容量允许差为2.0ml，按均匀分布计算， 所以由量筒的允许误差引入的不确定度为：（3）均质器：将制备好的样品进行均质，每个样品按 GB 4789.3-2010中规定均质速度和时间进行均质，可认为由均质引入的不确定度可忽略不计。则，（4）样品制备过程中引入的不确定度由电子天平和量筒产生的相对不确定度合成，故（5）3.4样品稀释过程中引入的不确定度样品稀释过程中引入的不确定度主要是由10ml流出式吸量管（B类）、1ml流出式吸量管（B类）引入的不确定度。（1）10ml流出式吸量管：10ml流出式吸量管用于分装稀释用9ml无菌生理盐水，根据JJG196-2006［4］中规定，20℃时10ml（B级）的流出分度吸量管的容量允许差为±0.10ml，按均匀分布计算，所以由10ml流出式吸量管的允许误差引入的不确定度为：则，实际量取9ml无菌生理盐水时，（6）（2）1ml流出式吸量管：1ml流出式吸量管用于将待稀释的样品1ml加入稀释用9ml无菌生理盐水，根据JJG19