高效液相色谱法测定三七地上部分γ―氨基丁酸含量.docVIP

高效液相色谱法测定三七地上部分γ―氨基丁酸含量 　　[摘要] 采用高效液相色谱法测定不同产地的三七地上部分中γ-氨基丁酸的含量。色谱条件采用C18柱色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈-4.1 gL-1醋酸钠缓冲液为流动相，检测波长为254 nm。γ-氨基丁酸在0.01～1.03 gL-1线性范围内线性关系良好； 三七茎叶和花中γ-氨基丁酸的平均加样回收率分别为101.7%（RSD 1.1%，n=3）和97.3%（RSD=0.38%，n=3）。结果表明，不同产地的三七茎叶和花样品GABA含量差异较小，但三七花中GABA平均含量高于茎叶，分别为0.49%，0.53%。该方法操作简便、结果稳定，适合于三七地上部分中γ-氨基丁酸含量测定，为三七地上部分资源综合开发提供依据。 [关键词] 三七地上部分；γ-氨基丁酸（GABA）；异硫氰酸苯酯（PITC）；高效液相色谱；含量测定 γ-氨基丁酸（GABA）作为神经递质，具有诸多生理功能，如调节血压与心率、治疗神经退行性疾病、保肝利肾、抗衰老、促进生长激素分泌、预防肥胖等功效[1-3]。日本和台湾分别在2001年和2005年将GABA列为食品级，相继国家卫生部也于2009年将GABA列为新资源食品。据文献报道，GABA检测方法有比色法[4]、高效液相色谱法（HPLC）[5-7]、GC-MS[8]等。由于GC-MS检测仪器价格昂贵、操作复杂，在测定植物中有效成分含量时普遍采用HPLC，其优点为灵敏度高、检测快、操作简便等，应用于茶叶、苦荞、桑叶等[9-11]植物的GABA含量测定中。相关研究表明三七主根中不含有GABA[12]，但对三七地上部分中GABA的研究尚无报道[13-14]。三七地上部分（花和茎叶）资源丰富，富含多种成分如皂苷类、黄酮类、氨基酸类、挥发油类、微量元素等。现阶段三七花用途单一，三七茎叶则被大量弃在田间，仅有5%的茎叶资源被利用，资源开发明显不足，对三七地上部分资源的综合开发具有潜在的市场空间。本研究采用PITC柱前衍生化高效液相色谱法测定三七地上部分中GABA含量，为三七地上部分资源综合开发提供依据。 1 材料 1.1 仪器 LC-20AB高效液相色谱仪（日本岛津公司，包括在线脱气机DGU-20A3R（C）、二元泵LC-20AB、自动进样器SIL-20A、柱温箱CTO-20A、检测器SPD-20A）；Thermo Scientific Hypersil GOLD C18色谱柱（美国Thermo Scientific公司，4.6 mm×250 mm，5 μm）；CP114电子天平（上海奥豪斯仪器有限公司）；FLB-200型万能高速粉碎机（上海菲力博食品机械有限公司）；TD25-WS台式低速离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）；优普系列超纯水器UPT-I-20T（成都超纯科技有限公司）。 1.2 试剂 γ-氨基丁酸（上海源叶生物科技有限公司，纯度≥99%）；异硫氰酸苯酯（成都格雷西亚化学技术有限公司）；乙腈（美国Sigma-Aldrich公司）；甲醇（美国Sigma-Aldrich公司）；超纯水（来自优普系列超纯水器），其他所有试剂均为国产分析纯。 1.3 样品采集与预处理 在2012年8月～10月，根据三七不同主产区、不同海拔以及近年新增的种植区域，选取海拔1 000～2 000 m适宜三七生长的地区，到三七的主产区云南省文山州和红河州多地采集新鲜的三七茎叶和花样品（表1），洗净，晾干，并将干燥的三七茎叶与花粉碎，备用。 2 方法与结果 2.1 对照品溶液的制备 精密称取10.3 mg GABA对照品，置10.0 mL量瓶中，加水定容至刻度，摇匀即为1.03 gL-1 GABA对照品溶液。分别用水依次稀释至0.50，0.10，0.08，0.05，0.02，0.01 gL-1的GABA溶液，摇匀备用。 2.2 样品制备 准确称取0.2 g三七茎叶和花粉末置于15.0 mL离心管中，加入2.0 mL水，涡旋振荡，超声15 min，重复3次，置于离心机中，在3 500 rmin-1的转速下离心10 min，取上层清液备用。 2.3 样品柱前衍生化 分别取400.0 μL样品上清液和对照品溶液，加入200.0 μL PITC-乙腈（25∶1 000）和400.0 μL三乙胺-乙腈（1.4∶8.6），涡旋振荡，静置2 h。加入1.0 mL正己烷，涡旋振荡，静置待分层后吸取下层溶液，经0.45 μm滤膜过滤。将滤液用氮气吹干，检测前用甲醇-水（1∶1）复溶。 2.4 色谱条件 色谱柱为Thermo Scientific Hypersil GOLD C18色谱