mm_fs_cng_0234 复合预混料中烟酸、叶酸的测定.docVIP

天马行空官方博客：/tmxk_docin ；QQ:1318241189；QQ群：175569632 MMFSCNG0234 复合预混料 烟酸 叶酸 高效液相色谱法 MM_FS_CNG_0234 复合预混料中烟酸、叶酸的测定 1.适用范围 本方法适用于复合预混料和维生素预混料中烟酸、叶酸的测定。测量范围为每千克样品中含烟酸的量在1000mg以上，含叶酸的量在500mg以上。 2.原理概要 试样中的烟酸、叶酸用水-甲醇-乙酸混合溶液提取，将滤液注入高效液相色谱反相柱上进行分离，用紫外检测器在280nm波长处定量测定。 3.主要试剂和仪器 3.1.主要试剂 甲醇：优级纯；三乙胺；冰乙酸； 己烷磺酸钠(PICB6)：c〔CH3(CH2)5SO3Na〕＝0.005mol/L{或 ρ〔CH3 (CH2)5SO3Na〕＝941mg/L}。 标准溶液配制 烟酸标准贮备液：称取经过干燥的烟酸标准纯品25.0mg，置于250mL棕色容量瓶中，用移动相溶解，稀释至刻度，于冰箱保存，可放置一周。 叶酸标准贮备液：称取经过干燥的叶酸标准纯品25.0mg，置于250mL容量瓶中，用碳酸钠溶液溶解，调至pH7.0定容，于冰箱保存。 烟酸、叶酸标准工作液：准确吸取烟酸标准贮备液和叶酸标准贮备液各10mL，用移动相稀释至50mL或100mL，该混合标准溶液置于带盖小瓶贮存，供液相色谱仪分析用，当日使用。 提取液：取500mL去离子水，加10mL冰乙酸，1.3mL三乙胺，用去离子水定容至1 L，此时pH为3.2，过0.45μm滤膜，取上述溶液850mL与150mL甲醇混合。 磷酸缓冲液：称取4.84g的磷酸氢二钾(K2HPO4)，9.82g磷酸二氢钾(KH2PO4)，溶于去离子水中，加20mL乙腈，用去离子水定容至1L，混匀用20%氢氧化钾调节pH至6.5。 碳酸钠溶液（0.1mol/L）。 3.2.仪器 实验室常用仪器设备。 超声波水浴。 超纯水装置(Millipore或全磨口玻璃蒸馏器)。 离心机：3000r/min。 高效液相色谱仪：带自动进样器、紫外可调波长检验器。 4.试样制备 选取有代表性的样品至少500g，四分法缩减至100g，磨碎，全部通过0.28mm孔筛，混匀，装入密闭容器中，避光低温保存备用。 5.过程简述 5.1.试验溶液的制备 称取试样维生素预混料0.5～1g或复合预混料1～5g，精确至0.0001g。置于100mL棕色容量瓶中，加10mL碳酸钠溶液，浸湿试样加70mL提取液混匀，于超声波水浴上振荡提取15min，用提取液定容至刻度，混合均匀，过滤或离心。再经0.45μm过滤膜过滤至带盖小瓶中，调整该试验溶液的浓度≤5μg/mL，供高效液相色谱分析用。 5.2.测定 5.2.1.色谱条件 .反相离子对色谱条件 柱长：25cm、内径4.0mm不锈钢柱。 固定相：ODS(C18)粒度5μm。 移动相：取500mL去离子水，加10mL冰乙酸，1.3mL三乙胺，一小瓶20mL已烷磺酸钠，用去离子水定容至1L，调节pH为3.2，过0.45μm滤膜，取上述溶液850mL与150mL甲醇混合，脱气。 流速：1.0mL/min。 温度：30℃。 进样量：20μL。 检测器：紫外检测器，使用波长275nm。 .反相色谱 柱长：25cm，内径4mm，不锈钢柱。 固定相：Lichrospher CH-8/11，粒度5μm。 移动相：2%乙腈磷酸缓冲液 流速：1.4mL/min。 温度：室温。 进样体积：20μL。 检测器：紫外检测器，使用波长280nm。 5.2.2.定量测定 按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数和灵敏度(AUFS)，色谱峰分离度符合要求。用两次以上相应标准工作液对系统进行校正。向色谱柱注入相应的烟酸、叶酸标准工作液(Vst)和试验溶液(Vi)得到色谱峰面积响应值(Pst、Pi)，用外标法定量测定。 6.结果计算 结果按式(1)计算： ωi＝ Pi×V×ρi×Vst …………………………(1) Pst×m×Vi 式中：ωi——每千克试样中含烟酸或叶酸的量，mg； m——试样质量，g； V——提取液的总体积，mL； ρi——标准溶液中烟酸或叶酸浓度，μg/0mL； Vst——烟酸或叶酸标准溶液进样体积，μL； Vi——从试验溶液中分取的进样体积，μL； Pst——与标准溶液进样体积(Vst)相应的峰面积响应值； Pi——与从试验溶液中分取的进样体积(Vi)相应的峰面积响应值。 平行测定结果用算术平均值表示，保留有效数3位。 7.允许差 同一分析者对同一试样同时