实验一 大肠杆菌的分离和培养.ppt

微生物是一切肉眼看不见的或看不清的微小生物的总称。 特点：结构简单,有单细胞的,简单多细胞的,非细胞的。 种类： 原核：细菌、蓝藻、放线菌、螺旋体、支原体、立克次氏体、衣原体 真核：真菌、藻类、原生动物 非细胞类：病毒 基础知识 一.微生物与微生物种类 细菌的菌落 菌落：生长在固体培养基上，由单个细胞繁殖形成的、肉眼可见的细菌群体。 各种微生物在一定条件下形成的菌落特征（如大小、形状、边缘、表面、质地、颜色等）具有一定的稳定性，是衡量菌种纯度、辨认和鉴定菌种的重要依据。 二.微生物的营养 1.碳源【糖类、脂肪、有机酸】：能源物质，构成菌体和代谢产物 2.氮源【无机氮源：氨水、硫酸铵、尿素、硝酸钠；有机氮源：麦麸、玉米浆、蛋白胨】：构成菌体和代谢产物 3.无机盐【 P、Mg、S、Fe、K、Na、Pb、Cl、Zn、Co、Mn等】：维持酶活力，调节渗透压、pH值等 4.水： 5.生长因子【维生素、氨基酸、碱基等】：一般是酶和核酸的组成成分 培养基配制原则：P16 第一，目的要明确 第二，营养要协调 第三，PH要适宜 三.培养基 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长的营养基质 培养基的种类： 根据物理性质 液体培养基 固体培养基 根据用途 选择培养基 鉴别培养基 四.无菌技术 P15 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵 1、对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒 2、消毒与灭菌 干热灭菌法（灼烧：接种环、试管口 干烤（140~160℃，2-3h）金属、玻璃器皿） 湿热灭菌法 巴氏消毒法：主要用于牛乳消毒。 煮沸法（100 ℃，5min）食具、注射器等消毒 高压蒸汽灭菌法 121℃,15-30min 原理：波长200-300nm的紫外线具有杀菌作用。其中260-266nm波长UV与DNA吸收光谱一致。其主要作用于DNA，使一条DNA链上相邻的两个胸腺嘧 啶共价结合形成二聚体，干扰DNA复制与转录，导致细菌变异和死亡，并可杀灭病毒。 特点：穿透力较弱 应用：物体表面及空气消毒 紫外线消毒（灭菌）法 注意保护眼睛 实验操作 教师做的： 制备培养基，倒平板，菌种扩增 （P16-17） 菌种扩增 摇床震荡培养12h（于LB液体培养基中） 实验操作（同学做） 大肠杆菌的培养和分离 原核生物，异养兼性厌氧型，二分裂方式繁殖，一般无害，在基因工程中常被用作运载体 同学做的： 大肠杆菌接种 接种环灭菌 蘸取标本 接种 标准结果 ① ④ ③ ② 平板划线分离（P18） 烧至暗红 灼烧接种环 将接种环垂直于酒精灯火焰上，使接种环自顶端直至整条烧红后再将接种环在火焰上通过几次。 平板划线 土壤中微生物的分离（稀释涂布平板法P19 ） 用移液器取200微升 涂布器涂布 培养 为什么要倒置培养？ 恒温37℃培养 消毒(disinfection)：杀死物体上病原微生物的方法，并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。用以消毒的药品称为消毒剂(disinfectant)。 灭菌(sterilization)：杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物。 抑菌(bacteriostasis)：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常用的抑菌剂为各种抗生素。 防腐(antisepsis)：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。细菌一般不死亡。 无菌(asepsis)：不存在活菌，多是灭菌的结果。 无菌操作（antiseptic technique）防止微生物进入人体或物体的操作技术。 灭菌与消毒 * 碳源、氮源均有速效与迟效之分：如葡萄糖、氨水是速效的，而脂肪、蛋白质则较难被利用，但注意生产中并非速效就好，如青霉素生产中如葡萄藤浓度过高会导致细菌代谢过于旺盛，产生大量有机酸，使PH下降，而产青霉素菌在较低PH值下的产青霉素能力会大幅度下降。 通常的策略是在种子扩大时期采用速效营养源，而在主发酵时期采用迟效营养源，控制代谢方向，延长有效生产时期。 Pb（铅）Co钴 * 碳源、氮源均有速效与迟效之分：如葡萄糖、氨水是速效的，而脂肪、蛋白质则较难被利用，但注意生产中并非速效就好，如青霉素生产中如葡萄藤浓度过高会导致细菌代谢过于旺盛，产生大量有机酸，使PH下降，而产青霉素菌在较低PH值下的产青霉素能力会大幅度下降。 通常的策略是在种子扩大时期采用速效营养源，而在主发酵时期采用迟效营养源，控制代谢方向，延长有效生产时期。 Pb（铅）Co钴