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利用差减杂交分离具有进化保守性的睾丸表达的基因3
动物学报 48 (6) :833～836 , 2002
A cta Zoologica S inica
利用差减杂交分离具有进化保守性的
睾丸表达的基因
黄 晓 郭一清 程汉华 周荣家
(武汉大学生命科学学院 , 武汉 430072)
关键词 性腺 差减杂交 性别逆转 进化
性别决定和分化的研究一直是生命科学中的一
1 材料和方法
个重要领域。自 20 世纪 90 年代初在人和哺乳动物
中找到了睾丸决定因子 ( TDF) S R Y/ S ry 基因以 11 人睾丸特异的差减 cD NA 质粒文库的构建
来 , 已经发现了几个与性别决定与分化相关的基 人睾丸特异的差减 cDNA 购于 Clontech ( 美
)
因: W T1 , S F 1 , DA X1 , S O X 9 , DM R T 1 等 国 公司 , PCR 扩增按其手册进行。扩增引物
(Blanche et al . , 2000 ; Huang et al . , 1998 ; Zhou DNA 序列如下 : 引物 1 , 5′TCGA GCGGCCGCC
et al . , 1997) , 研究还发现性别的决定和分化是一 CGGGCA GGT3 ′; 引 物 2 , 5 ′A GGGCGTGGT
μ (
种由多基因参与的极其复杂的调控过程。尽管不同 GCGGA GGGCGGT3 ′。以 上 引 物 各 1 l 400
) μ μ
进化地位的生物具有不同的性别决定和发育的分子 pmol/ L , 25 l 10 ×PCR 缓冲液 , 15 l 的 Mg
Cl ( ) μ
机制 , 但是性别性状从低等的果蝇、线虫到高等的 2 15 mM , 1 l 睾丸特异的差减 cDNA , 05
哺乳动物和人类都具有进化保守性 , DM R T 1 基因 μ ( ) μ μ
l 的 dN TP 02 mM , 173 l H O , 0 2 l
2
( Raymond et al . , 1998) 的克隆也进一步表明性 ( 1U) Taq DNA 聚合酶。于 PCR 仪上 94 ℃变性 5
别发育从果蝇、线虫到哺乳动物都具有类似的分子 min , 进行 11 个循环 : 94 ℃30 s , 68 ℃40 s , 72 ℃
机制。 90 s 。扩增结束后 , 取 5 μ
l 产物于 1 %的琼脂糖胶
黄鳝生命过程中具有典型的天然性转变现象 , 上电泳检测。20 μ
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