鸡源和猪源乳杆菌胆盐水解酶的表达及酶学性质比较.pdfVIP

微生物学通报 Dec. 20, 2017, 44(12): 2871−2877 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.170407 研究报告 鸡源和猪源乳杆菌胆盐水解酶的表达及酶学性质比较 郭芳芳 王雅蕾 李忍 吴晓敏 黄建国 杨兵 徐福洲* (北京市农林科学院畜牧兽医研究所 畜禽疫病防控技术北京市重点实验室 北京 100097) 摘 要：【目的】随着抗生素生长促进剂(AGPs)在动物饲料中逐步禁止使用，AGPs 替代物的研 究成为热点。由于胆盐水解酶(BSH)在脂类代谢中的关键作用，成为 AGPs 替代物研究的一个 重要方向。在原核表达和纯化的基础上鉴定鸡源和猪源乳杆菌BSH 在酶学性质方面的差异性。 【方法】分别对鸡源胆盐水解酶(BSHc)和猪源胆盐水解酶(BSHp)基因进行原核表达和蛋白纯化， 通过测定对6 种甘氨结合胆盐和牛磺结合胆盐的水解效率获得两种酶的酶学动力学性质，进而测 定了温度、pH 和金属离子对酶活力的影响。【结果】BSHc 和BSHp 对甘氨结合胆盐的水解效率 高于牛磺结合胆盐，BSHc 对甘氨结合胆盐的水解效率较BSHp 稍高；BSHc 和BSHp 的最适酶 2+ 3+ 解温度分别为45 °C 和42 °C；BSHc 和BSHp 的最适反应pH 分别为6.0 和5.4；含有Cu 、Fe 、 Mn2+和Zn2+ 的金属盐对BSHc 和BSHp 的酶活力均具有不同程度的抑制作用，特别是Cu2+和Fe3+ + + 2+ 2+ 抑制作用比较强；含有Na 、K 、Mg 和Ca 的金属盐对BSHc 和BSHp 酶活力的抑制作用相对 较弱或无抑制作用，但KIO 对BSHc 和BSHp 酶活力具有强抑制作用，KI 和CaCl 对BSHp 酶 3 2 活力也具有较强的抑制作用。【结论】原核表达和纯化的BSHc 和BSHp 对甘氨结合胆盐的水解 效率高于牛磺结合胆盐，BSHc 的最适酶解温度和pH 稍高于 BSHp ，Cu2+ 、Fe3+ 、Mn2+和 Zn2+ 等金属离子对BSHc 和BSHp 酶活力具有明显抑制作用，试验结果为鉴定BSH 抑制物进而研制 AGPs 替代物奠定了基础。 关键词：胆盐水解酶，酶活力，温度，pH ，金属离子 Expression and characterization of bile salt hydrolase from chicken and porcine Lactobacillus GUO Fang-Fang WANG Ya-Lei LI Ren WU Xiao-Min * HUANG Jian-Guo YANG Bing XU Fu-Zhou (Beijing Key Laboratory for Prevention and Control of Infectiou