原生质体融合技术简介.pptVIP

中国科学院青岛生物能源与过程研究所 Qingdao Institute of Bioenergy and Bioprocess Technology 原生质体融合技术及方法简介 －*－ 内容 原生质体融合技术及应用发展介绍 原生质体融合的具体操作方法 －*－ 原生质体融合 定义：指用自然或人工方法、使两个或更多个不同的细胞融合成一个细胞的过程，又称为体细胞杂交 －*－ 原生质体融合的特点 杂交频率较高 霉菌与放线菌的融合频率为10-3～10-1，细菌与酵母的融合频率亦达到10-3～10-6 受接合型或致育性的限制较小 任何一株都可能起受体或供体 ，有利于不同种属间微生物的杂交 重组体种类较多 遗传物质的传递更为完整 可获得性状优良的重组体 可提高育种效率 可采用产量性状较高的菌株作为融合亲株 －*－ 原生质体研究的发展 －*－ 1838 Muller 动物病理组织中发现多核细胞 1873 Lugmbuthl 天花病脓胞周围发现多核细胞 1896 Unna 水痘侵害过的皮肤中发现多核细胞 1931 Wathin 麻疹病人扁桃腺中发现多核细胞 1954 Bnders et al 组织培养中发现麻疹病毒能诱导细胞用和成多核体 1958 Marston 用副流感病毒诱发细胞融合 1970 Power et al 探索用硝酸钠诱导植物原生质体融合 1972 Carlson 用NaNO3进行了烟草种间原生质体融合 1972 Ferenczy et al 以白地霉营养缺陷型为材料经原生质体融合首次完成异核体形成 1974 Michayluk 发现PEG是一种良好的聚合剂用于原生质体融合 1976 Ferenczy et al 以曲霉 青霉营养缺陷型为材料经原生质体融合首次完成异核体形成 1976 Fodor et al 巨大芽孢杆菌内株间原生质体融合成功 1977 Hopwood 链霉菌原生质融合并获融合重组子 1978 Gleba et al 用PEG+高pH-Ca2+研究原生质体融合 1981 Menczel 用高pH-Ca2++9℅DMSO与少量PEG获得较高的融合率 1988 Kirimalra et al 原生质体PEG融合获得黑曲霉二倍体柠檬酸高产菌株 2002 Stemmer et al 一种新的体内分子育种方法——全基因组改组技术 原生质体融合的优势 －*－ 打破了微生物的种界界限，可实现远缘菌株的基因重组。可使遗传物质传递更为完整、获得更多基因重组的机会。可与其他育种方法相结合，如把常规诱变和原生质体诱变所获得的优良性状，组合到一个单株中。 提高代谢产物的产量和质量 提高菌株降解能力 提高菌株抗受性 改良菌种的遗传特性 获得新代谢途径和性状 融合亲本菌株 融合子 融合结果 作者 产普纳霉素始旋链霉菌（S．pristinaespiralis）CGMCC0957突变菌 4株突变产量较高菌株融合 得到普纳霉素产量比亲本高89.4%，达到0.89g/L的优良菌株 Xu 多杀菌素产生菌Saccharopolyspora spinosa 10株产量较高的菌株进行融合 多杀菌素产量可达到547mg/L，较出发菌提高200.55% Jin 黑曲霉(Aspergillus niger) 经紫外或EMS诱变，筛选胞外葡萄糖氧化酶活性最高菌株进行融合 葡萄糖氧化酶产量最高为62.7u/ml，较亲本提高了394.3% Khattab 酵母 对铬有较高抗性和除铬性能较高的两种酵母进行融合 处理低浓度含铬废水时，去除率和还原率可达100%，处理高浓度含铬废水(200mg/L)时，还原率达50% 卢显妍 黑曲霉(Aspergillus niger)与阿特拉津降解菌青霉(Penicillium sp) 双亲灭活融合 使土壤中阿特拉津降解半衰期由30天缩短为10天 崔俊涛 蒽降解菌An和土生优势菌Tu 耐蒽能力提高，40天时对蒽降解能力比亲本高15.2% 尹红梅 白腐真菌(Phanerochaete)和白地霉(Geotrichum candidium) 白腐真菌能有效降解木质素，白地霉可生成单蛋白质 融合子可将木质素有109降到54g/kg，使得秸秆中蛋白质由48提高到67g/kg Zhang 酿酒酵母(S. cerevisiae) 经紫外诱变得到能于43℃生长的两突变株进行融合 选育出能耐受55℃高温的融合菌株 Shi 哈茨木霉(Trichoderma h