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工业菌种改良述评 微生物发酵要想取得优良成绩,有赖于优良菌种的利用。人们已经熟知,生物 体的表型是由其遗传型和环境条件相互作用所决定的。因而,从工业发酵的观点 来看发酵菌种的优异生产性能等于经选育的、符合经济要求的优良遗传背景加上 经人为精心设计的、优化的发酵环境。菌种选育的最终目标,就是通过人工干预, 使选出的优良菌种在优化环境中尽可能表现出优异性状。菌种分离、筛选、改良 是贯彻微生物发酵始终的工作。本文就此作一简要回顾。 1 微生物菌种选育的必要性和具体目标 1.1 大自然中蕴藏着无数具有实际或潜在应用价 值的微生物资源,源源不断的开发微生物资源是人类社会持续发展的必由之路。 由于现代社会经济的高速发展,人口、资源、能源、环境等问题日趋严重。迫于 这样的压力,人们对微生物资源的需求日益增加,开发步伐随之加快。但是,虽然 大自然中微生物资源异常丰富,但人们知道的微生物种类大约仅为总数的10%, 而真正被利用的还不到1%,进一步开发利用的潜力很大[1]。 1.2 菌种技术的进步是发酵工业发展的重要依托。微生物菌种来源于自然。在 长期的进化过程中,微生物形成了一整套精密的代谢控制机制,不会过量生产超 过其自身生长、代谢需要的酶或代谢产物。微生物细胞内具有反馈抑制、阻遏等 代谢调控系统。育种工作者的任务是设法在不损及微生物基本生命活动的前提下, 采用物理、化学或生物学以及各种工程学方法,改变微生物的遗传结构,打破其原 有的代谢控制机制,使之成为“浪费型”菌株。同时,按照人们的需要和设计安排, 进行目的产物的过量生产,最终实现产业化的目的。 1.3 菌种选育改良的具体目标包括 (1)提高产量。生产效率和生产效益总是排在一切商业发酵过程首位的目标。 (2)提高产物的纯度,减少副产物;提高有效组分;减少色素等杂质。 (3)改变菌种性状,改善发酵过程,包括:改变和扩大菌种所利用的原料结构;改善 菌种生长速度;提高斜面孢子化程度;改善菌丝体形状,采用菌球菌丝体发酵;少 用消泡剂或使菌种耐合成消泡剂;改善对氧的摄取条件,降低需氧量及能耗;耐不 良环境:抗噬菌体的侵染,耐高温、耐酸碱、耐自身所积累的代谢产物;改善细胞 透性,提高产物的分泌能力等。 (4)菌种的遗传性状,特别是生产性状稳定。 (5)改变生物合成途径,以获得新产品。 2 获取优良菌种的有效途径 广义上说,菌种改良可描述为采用任何科学技术手段(物理、化学、生物学、工程 学方法以及它们的各种组合)处理微生物菌种,从中分离得到能显示所要求表型 的变异菌种。菌种改良的基本途径:突变和选择;基因重组(遗传重组)和基因工程 (遗传工程)。 2.1 传统的(“经典的”)诱变及筛选是最常用的菌种改良手段。关键的第一步 是用物理、化学或生物的诱变因子修改目的微生物的基因组(genome),产生突变 型。微生物的自发突变频率在10-5~10-8之间,经诱变剂处理微生物细胞后,可大 幅度提高突变频率,达到10-3~10-6,这比自发突变提高了上百倍。 (1)菌种选育常用的诱变剂 菌种选育常用的诱变剂见表1。 另外,在实践中也还有用抗生素作为诱变剂的实例。根据抗生素对微生物菌 种具有生物学效应,如用制霉菌素(nystatin)处理产黄青霉,可引起细胞质膜渗 透性变化,促进硫酸盐的摄入,增加青霉素的合成;把专一性作用于DNA的抗肿瘤 抗生素丝裂霉素C处理春日霉素产生菌,可得到高产突变型。 (2)诱变育种中考虑的若干因素 诱变剂的作用是扩大基因突变的频率,因此应选择高效诱变剂如NTG、 60Coγ-射线、UV等;考虑诱变剂的种类、剂量、处理时间等诱变条件;诱变剂对 DNA损害的类型和损害的程度;两种以上诱变剂的复合处理;诱变后的处理条件; 被处理微生物的生理状况:处理的是营养体细胞、休眠体芽孢、分生孢子还是除 去细胞壁的原生质体;细胞是单核还是多核;菌种对诱变剂的敏感性和同一种诱 变剂处理同一菌种的次数(频率)以及每次诱变处理后菌种产量提高的幅度以及 其他性状的改进等。 当前发酵工业中使用的高产变异菌株,大部分都是通过诱变而大大提高了生 产性能的菌株。诱变育种具有方法简便、快捷和收效显著等特点,所以仍然是目 前被广泛使用的主要育种方法之一。 (3)诱变育种在菌种改良上的成绩