乳腺癌中ABCG2、P-gp及血标本淋巴细胞亚群研究.docVIP

精品论文 参考文献 乳腺癌中ABCG2、P-gp及血标本淋巴细胞亚群研究 郭建美1 郑淑君1通讯作者 魏 娜1 黄 韬2 　　1.保定市第一中心医院 河北保定 071000； 　　2.保定市儿童医院 河北保定 071000 　　【摘 要】目的：通过检测乳腺癌组织中ABCG2、P-gp蛋白的表达和外周血标本T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞亚群及NK细胞比值，探讨其相关性和临床意义。方法：1免疫组织化学方法检测20例乳腺癌组织中ABCG2、P-gp蛋白表达情况；2四色荧光标记流式细胞术检测相同患者术前外周血T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞亚群及NK细胞比值。结果：ABCG2蛋白表达与乳腺癌患者淋巴细胞亚群中CD4+淋巴细胞、CD8+淋巴细胞、CD4+/CD8+比值和NK细胞比值无关（P＞0.05），与CD3+淋巴细胞（r=-0.600）和B淋巴细胞计数(r=-0.503)有关（P＜0.05）。P-gp蛋白表达与乳腺癌患者淋巴细胞亚群中CD3+淋巴细胞、CD4+淋巴细胞、CD8+淋巴细胞、CD4+/CD8+比值和B淋巴细胞计数无关（P＞0.05），与NK细胞比值有关（r=0.471,P＜0.05）。结论： ABCG2蛋白表达与乳腺癌患者淋巴细胞亚群中CD3+淋巴细胞和B淋巴细胞计数具有相关性,提示乳腺癌患者乳腺癌耐药蛋白表达可能与机体免疫功能相关。P-gp蛋白表达与乳腺癌患者淋巴细胞亚群中NK细胞比值具有相关性,但是对乳腺癌患者T淋巴细胞和B淋巴细胞无相关性,提示乳腺癌患者P-糖蛋白表达可能与机体NK细胞杀伤功能相关。 　　【关键词】乳腺癌；淋巴细胞亚群；免疫组织化学；流式细胞术 　　【中图分类号】R737 【文献标识码】A 【文章编号】1674-8999（2015）9-0604-02 　　近年来，乳腺癌的发病率呈逐年上升趋势，研究发现肿瘤的多药耐药直接影响到乳腺癌患者化疗疗效，成为化疗失败的重要难题。并且肿瘤的发生和发展是一个非常复杂的过程,与机体免疫功能具有密切的关系。Ahmed等对早期造血细胞的研究表明，在体外ABCG2 可使原祖细胞增加，CD19＋淋巴细胞的发育受损，降低移植小鼠B淋巴细胞数量；在体内ABCG2增加部分祖细胞的比例和原始祖细胞群的数量，在早期造血过程中作为调节蛋白起到重要的作用。所以探讨ABCG2、P-gp在乳腺癌中的表达及与淋巴细胞亚群的关系不仅可以了解乳腺癌患者自身耐药情况，对术后应用化疗药物具有重要的指导作用，并且在理论的指导下进行实践具有一定的创新意义。 　　1 一般资料 　　1.1 标本来源 　　免疫组织化学方法标本取自保定市第一中心医院2008年9月～2010年12月手术治疗的乳腺肿瘤患者的存档蜡块。标本均常规取材，中性甲醛固定，常规石蜡包埋，5mu;m厚连续切片。其中乳腺癌85例，包括浸润性导管癌（非特殊型）66例，浸润性小叶癌15例，髓样癌2例，导管内癌2例，病理分期（按2010AJCC乳腺癌分期标准）为I～III期，年龄34～62岁，平均年龄47.4岁；同时取乳腺纤维腺瘤组织40例为对照组，年龄23～42岁，平均年龄31.2岁。 　　全部标本均经病理证实，所有病例术前均未进行放疗、化疗及内分泌治疗。 　　1.2 研究方法 　　采用免疫组织化学SP两步法进行ABCG2、P-gp检测。小鼠抗人BCRP/ ABCG2 单克隆抗体BXP-21( ab3380)购自英国 Abcam 公司，稀释浓度为1:20，P-gp抗体及相关试剂盒均购自迈新生物技术开发有限公司，步骤严格按照试剂盒说明操作。流式细胞术采用美国Beckman Coulter 公司四色数字化流式细胞仪及其相应配套试剂。采集肿瘤病人及健康体检者血标本，取标记抗体各10mu;l 分别加入TruCOUNT试管管底,然后加入EDTA抗凝血100mu;l ,充分混匀,室温避光染色20min ,再加入溶血素500mu;l,充分混匀,室温避光15min，再加500mu;l的PBS，室温避光10min，后进行流式细胞术分析。 　　2 统计学分析 　　数据结果采用统计软件SPSS11.5进行统计分析，ABCG2和P-gp蛋白表达与乳腺癌患者淋巴细胞亚群各指标相关性分析，采用Spearman等级相关分析，均以alpha;=0.05作为检验标准。 　　3 结果 　　3.1 乳腺癌患者组织中ABCG2蛋白表达与相同患者术前外周血淋巴细胞亚群中CD4+淋巴细胞、CD8+淋巴细胞、CD4+/CD8+比值和NK细胞比值无关（Pgt;0.05），与CD3+淋巴细胞和B淋巴细胞计数有关。CD3+淋巴细胞比值正常者ABCG2蛋白表达率（10.0%）低于不正常时（40.0%），差异有统计学意义（Plt;0.05）；B淋巴细胞比值正常者ABCG2蛋白表