应用纳米磁珠实时荧光PCR检测非洲木薯花叶病毒研究.pdfVIP

中国摩学通报 2013，29(6)：203—207 ChineseAgriculturalScienceBulletin 应用纳米磁珠实时荧光PCR检测非洲木薯花叶病毒 张永江’，马 洁 ，李桂芬 ，鲁 洁’，辛言言 ，孔 君 ，李明福 ，邓丛 良，朱水芳 (中国检验检疫科学研究院，北京 100029；北京出入境检验检疫局，北京 100026) 摘 要：建立非洲木薯花叶病毒(Africancassavamosaicvirus,ACMV)灵敏快速的纳米磁珠实时荧光PCR 检测技术，防止其传入 中国。采用TaqMan探针结合纳米磁珠(magneticnanoparticles，MNPs)技术，以外 壳蛋白基因为 目标基因，通过特异性及灵敏度试验建立MNP荧光PCR检测方法。成功建立了非洲木 薯花叶病毒(ACMV)的MNP荧光PCR检测方法；该方法检测阈值约为13PgDNA，比普通PCR及 ELISA方法灵敏度高25倍；该方法具有良好的特异性，能够有效区分双生病毒属的ACMV、棉花曲叶病 毒(CLCuV)、番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)~番茄严重曲叶病毒(ToSLCV)。MNP荧光PCR方法能够快 速灵敏的检测茎叶样品中的ACMv，无需任何PCR后处理，交叉污染风险小，适于口岸检验检疫。 关键词：非洲木薯花叶病毒；实时荧光PCR；检测 中图分类号：$412 文献标志码：A 论文编号：2012．2022 DetectionofAfricanC,~savaMosaicVirusbyReal—-timeFluorescentPCR CombiningwithM agneticNanopa~icles ZhangYongjiang，MaJie，LiGuifen，LuJie，XinYanyan，KongJun，LiMingfu’， DengCongliang2，ZhuShui~ng’ (C‘hineseAcademyofInspectionandQuarantine，Beijing100029； ~Beon／gEntry-exitInspectionandQuarantineBureau，Beijing100026) Abstract：Theaim ofestablishingasensitiveandrapidreal-timefluorescentPCR combiningwithmagnetic nanoparticlesmethodtodetectAfricancassavamosaicviurs(ACMV)wastopreventtheACMV from introducingintoChina．ByusingTaqManprobecombiningwithmagneticnanoparticlestechniqueandcoat proteingeneasthetargetgene，theMNP fluorescentPCRdetectionmethodwasestablishedafterspecificity andsensitivityexperiments．TheMNPfluorescentPCR detectiontechniquewassuccessfullydeveloped．The sensitivityofthemethodwas13PgofDNA，whichwas25timeshigherthanthatoftheconventionalPCRand ELISAmethod．Themethodhadgoodspecificityandcouldeffectivelydistinguishfourgeminiviruses，ACMV， Tomatoyellowleafcurlvirus(TYLCV)，Cottonleafcurlviurs(CLCuV)andTomatosevereleafcurlviurs (ToSLCV)．TheMNPflu