SPIFE4000全自动电泳系统使用体会.docVIP

精品论文 参考文献 SPIFE4000全自动电泳系统使用体会 李章勇1 许广伟2 国秀芝3 （1郴州市第一人民医院检验科 湖南郴州 423000) (2威海卫人民医院 山东威海 264200;3中国科学院北京协和医院检验科 100730） 【中图分类号】R197.39【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）2-0123-02 【关键词】免疫固定电泳 SPIFE4000系统 故障 目前美国Helena公司推出了便捷的SPIFE4000全自动电泳系统可进行蛋白电泳、免疫固定电泳、同功酶电泳、脂蛋白电泳等检测，现用该系统进行免疫固定电泳，体会如下： 1 标本留取 免疫固定电泳的标本可以是血标本、尿液或脑脊液[1]（目前本仪器暂测血、尿标本）。标本量须gt;2ml。血标本要求清晨空腹抽取静脉血，及时分离血清，忌用溶血标本及血浆标本；尿标本必须是清洁无污染，最好使用晨尿。 2 标本保存 标本可在2～6℃保存72h[2]，在此条件下，对免疫球蛋白影响不大。若短期内不进行实验，可在-20℃条件下保存1个月。避免反复冻融，使免疫球蛋白结构发生改变。 3 仪器的影响因素 3.1仪器的设定与保养 SPIFE4000系统分析免疫固定电泳(IFE)的过程是全自动的过程。仪器自动完成一系列操作，包括：加样到加样槽和琼脂糖凝胶片、电泳、免疫固定、冲洗、染色、脱色和干燥凝胶、使用可见光光密度计扫描凝胶、显示与打印结果等[3]。系统内置了包含血清、尿蛋白电泳和免疫固定电泳的预设置编程参数。如果需要的话，终端用户可以更改这些电泳的参数设定，任意创建新的电泳程序，电泳条带的长度和宽度也可以调节。在通常情况下，我们采用厂家推荐的程序设置。每天工作后按说明书对仪器进行日，周，月保养，清理机内废物，清洗抗体板和样品稀释板（抗体板应每24h清洗一次，然后用吐温溶液泡十分钟，晾干）。 3.2试剂盒的使用 使用美国Helena公司配套的血清免疫固定电泳试剂盒。试剂盒提供的凝胶片、点样刀锋、厚薄吸水纸、梳式吸水纸均为一次性的，可避免交叉污染。密封包装的琼脂糖凝胶胶片可在室温下保存，水平放置，在实验前方可打开包装，确保胶片水份不丢失。抗体试剂必须在2～6℃冰箱保存，若抗体失效则不能使用。 3.3仪器的准备工作实验前必须按照操作规程做好准备工作，添加点样刀锋，厚薄吸水纸，（点样刀锋的正反面很关键，不能放反，否则仪器会报警）安装干净的抗体板，放置抗体试剂，关好各个舱门。检查稀释液，染液，洗液是否充足，废液桶是否清空。然后运行管道清洗。 3.4实验前标本的处理 高浓度免疫球蛋白与抗体浓度不匹配，可造成抗原过量，过量的抗原能够溶解凝胶中形成的抗原抗体复合物，形成中空的条带。而且电泳区带着色太深，不便于结果的分析。所以实验前应调节免疫球蛋白的浓度，这是IFE最重要的前提。一般情况，结合血清蛋白电泳结果及历史结果，对标本稀释倍数进行判断，正常标本按蛋白固定（SP）泳道1:3稀释，IgG、IgM、IgA、kappa;、lambda;泳道各1：5稀释。当免疫球蛋白的浓度超出正常范围时，将该泳道标本稀释倍数进行调整。该仪器具有自动稀释功能，从原倍到1：14之间多种可供选择的稀释倍数。注意调整了稀释倍数的一组标本不能和常规标本放在一个传送转盘同时进行检测，应该换盘进行。 标本放置传送转盘时，注意标本管的高度，及血清液面要高于转盘面0.5ml。否则仪器会吸不到样，或损坏吸样针。 3.5实验过程 开始实验时，将预吸干的凝胶片放入凝胶保湿器中。其中胶片的吸水过程非常关键，吸水时要受力均匀，不能重复吸水，吸水的好坏直接影响结果的好坏。一切准备好后，按照程序开始，仪器自动完成整个电泳过程。若实验过程中有报警提示，及时处理。若因仪器中途故障而停止，需重复实验时，可人为选择进行未完成的步骤。 4 仪器常见故障及处理 4.1出现Control and/or NDDC out of rang报警，提示：质控或NDDC超出范围。报警原因：是电源波动问题。处理：检查电源，与Helena Laboratories公司联系。 4.2出现No sample dispensing into sample tray报警，提示：没有样品分配到样品槽中。报警原因：是去离子水瓶空、针堵塞、转盘中无样品、去离子水管中有气泡、管或泵故障。处理：重新填注去离子水、清洗针、装载转盘、灌注仪器、替换泵头。 4.3出现Stainer lever detector failures