Y 透明剂在临床病理制片中的应用体会.docVIP

精品论文 参考文献 Y 透明剂在临床病理制片中的应用体会 孙帅1 赖洵2（通讯作者） （ 1 云南省第一人民医院心内科 云南昆明 6 5 0 0 3 2 ） （ 2 云南省第一人民医院血液内科 云南昆明 6 5 0 0 3 2 ） 【摘要】目的：评价Y 透明剂在临床病理组织切片制作中的应用。方法：用Y 透明剂和二甲苯分别制作组织切片、经H E、特殊染色及免疫组化染色，观察比较实验效果。结果：用Y 透明剂制作的组织切片效果优于二甲苯。结论： Y 透明剂可以完全替代二甲苯。 【关键词】Y 透明剂 二甲苯 毒性 病理制片 【中图分类号】R319 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）07-0014-02 病理技术是病理学诊断不可分割的一部分，制片质量的好坏很大程度上影响病理医生做出正确的病理诊断。通常一张病理制片需要经过组织固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、贴片烤片、脱蜡、染液等十几歩才能完成，其中切片脱水透明是非常重要的一步。H E 染色后，要彻底脱水透明，才能进行树胶封盖，成为永久标本。如果脱水透明不彻底， 封片后呈白色雾状，镜下模糊不清，过一段时间染片就褪色。脱水可使用无水乙醇，而透明液多采用二甲苯。 二甲苯具有极强的挥发性，易通过呼吸道吸入或皮肤黏膜接触进入人体，导致慢性中毒症状，卫生部将二甲苯中毒定为百种职业病中的一种[1]。因此，寻找一种质优且无毒的二甲苯替代品成为目前病理实验室不断探索的方向[2-4]。Y 透明剂是一种新型无毒透明剂。自2010 年至今， 昆明医学院第一附属医院、云南省第一人民医院、云南妇幼保健医院等多家医疗单位均选用Y 透明剂替代二甲苯用于病理制片，取得了良好效果，报告如下。 1 材料与方法 1.1 材料 各院送检的病理组织标本，包括肝、网膜、脾、肺、肾、皮肤、子宫刮宫物、胎盘、脾或血栓物等组织，标本固定于10% 中性福尔马林液中，取材大小为2c mtimes;1.5c mtimes;0.3c m，选取Y 透明剂和二甲苯制片各2000 张。 1.2 试剂 Y 透明剂：由昆明籁盾科技公司提供，是一种生物提取油混合物。酒精：分析纯，天津市天达净化材料精细化工厂。石蜡：上海华铃康复器械厂。二甲苯: 分析纯，成都化学试剂厂。 1.3 仪器设备 温箱：BHT ARTHUR H.THOMAS CO.U.S.A。摊烤片机：Y T -6B 型，湖北孝感亚光医用电子技术研究所。切片机： 德国Leica RM 2135。 1.4 操作方法 组织固定、脱水、透明及浸蜡：首先用同一次配制的10% 中性甲醛及Carnoy 固定液固定6 ～ 8h。固定结束后，流水冲洗2h。其次常规梯度酒精脱水，酒精浓度为75%、80%、95%、100%。完成组织脱水后，二甲苯组用分析纯瓶装二甲苯进行透明，Y 透明剂组用Y 透明剂透明。二甲苯和Y 透明剂都用两缸透明，以保持透明剂的纯度和浓度。最后使用60℃温箱浸蜡，把预先熔化的石蜡分两缸浸蜡。包埋、切片、脱蜡、贴片及烤片：使用与浸蜡相同的石蜡，包埋机包埋。轮转式切片机连续切片，切片厚度为5mu;m。二甲苯组用二甲苯脱蜡， Y 透明剂组用Y 透明剂脱蜡。载片涂抹贴片剂后贴片。烤片机烤片，温度70℃，时间1h。 1.5 染色方法 染色方法分两组进行，染色步骤中包括常用的HE染色, 特殊染色法有胶原纤维的万吉森染色（V G）法[5]，弹性纤维的醛复红染色法[6]，Gordon- Sweet 染色法[7]，酸性粘多糖的阿利辛蓝染色[8]，糖原的PAS 染色法[9]，基底膜的PASM 染色法[10]，乙型肝炎表面抗原的维多利亚兰（Victoria blue）染色[11]，免疫组织化学法中的主要抗体有癌胚抗原（CEA）抗体和高分子通量细胞角蛋白（CKH）抗体[12]。在探索性研究中我们对每一个切片用H E 染色法操作做一般性评估，在大规模研究中我们应用病理科常规的组织H E 染色、特殊染色及免疫组化方法评估。 2 结果 2.1 评估石蜡块 系统地评价石蜡块及制成切片后的质量，如果出现干燥、破碎或异味都要做出详细说明并登记，间隔6 个月到2 年的时间里长期维持对石蜡块的评估。结果使用Y 透明剂制做出来的组织石蜡块透明效果好，组织硬度适中，腊块容易切出3 ～ 4um 的连续切片，切片脱蜡彻底。不论是富含脂肪还是富含血管的组织切片效果均优于二甲苯，且无刺鼻性气味，在长期储存下石蜡块质量保存完好。 2.2 评估染色部分 评估人员采取双盲的方法对所有的切片进行编号和评价，应用不同的标准系统地登记染