杀松材线虫海洋真菌ml5的鉴定及培养条件研究.pdfVIP

第 3。卷第2 期 青 岛 大 学 学 报 （工 程 技 术 版 ） Vol.30 No.2 2 0 1 5 年 6 月 JOURNAL OF QINGDAO UNIVERSITY (ET) J u n .2 0 1 5 文章编号:1006 - 9798(2015)02 - 0102 - 06? DOI 10. 13306/j. 1006 - 9798. 2015. 02. 020： 杀松材线虫海洋真菌m l 5 的鉴定 及培养条件研究 李 子 ，周 长 景 ，陈 聪 聪 ，杜 桂 彩 ，李 丽 ，郭道森 (青岛大学 命科学学院 ，山 东 青 岛 266071) 摘要 ：针对危害松属植物 的重要病原物松材线虫 ，本文对采自青岛附近海域 的样 品进行 真菌分离 ，采用浸渍法对分离得到 的35 株真菌 的培养滤液进行 杀线活性测定，从 中筛选 得到了 1 株具有高杀松材线虫活性的真菌 ML - 5 ，用其培养滤液处理松材线虫72 h 时， 线虫 的校正死亡率可达86.51% 。通过 形 态学 观察 和 18S r D N A 序 列分析 ，将其鉴定为 青霉属 (.Penicillium)的一种 真菌 。对 ML - 5 的培养条件进行了研究，确定 菌 株 ML - 5 在 P D 培养基中杀线活性最佳 的培养条件是 ：100%海水浓度，初始 p H 值 5. 0〜 6. 0 ，培养 温 度 25 C ，培 养 时间7 d 。该研究为海洋真菌活性物质 的开发及在松萎蔫病 防治方面 的 应用提供了理论依据 。 关键词 ：海洋真菌 ？鉴 定；青霉 菌 ？松材线虫 ？杀线活性 ？培养条件 中图分类号 ：Q93-331; Q939. 11+8 文献标识码 ：A 松树萎蔫病 （Pine wilt disease, P W D)是 由松材 线 虫 (Bursaphelenchus a^Zcp/wZ : )及其携带 的致病细 菌共 同引起，该病 以松墨天牛为主要传播媒介 ，是松树 的一种毁灭性流行病害 [1]。在全球 范围 内，该病除了 直接对林业造成严重影响之外，还 间接地影 响旅游业和进出 口贸 易，引起 巨大的生态破坏和经济损 失 。自 1982年我 国首次在南京发现该病 以来，疫 区范围很快扩大到我 国东部沿海、南 部 、西 南 等 14个 省区 ，造成了 超 过 30 万 h m 2 松 林 和 5 亿 多株松树 的损失 ，造成经济损失上千亿元 ，并且每年呈扩大趋势 ，因此，对松树萎 蔫病 的研究已刻不容缓 [—3]。松萎蔫病 的早期 防治主要以化学药剂为主，但该方法对生态环境会产 长期 而广泛的破坏 ，且长期使用会导致线虫产 抗药性 。近年 来，松材线虫病 的 物 防治受到人们 的重视 ，主要 方法是寻找 内寄 或捕食性真菌、杀线虫微 物 以及开发 防植物 ，但此研究主要集 中在陆 环境 ，在方法 的使用上受到一定限制。因此，寻找新型、低 毒 、环境友好型的杀线虫活性物质十分必要。由于海洋生态环 境具有高盐 、低 温 、少氧等特殊性，使海洋微 物有着 区别于陆源微 物 的 命活动和代谢方式 ，并且产 种 类繁 多 、活性强而稳定的代谢产物 。目前，对具有杀线虫活性的海洋微 物研究 已有报道 ，郑海营等人 [4]从 青岛近海域筛选出2 株具有高杀线虫活性的 巨大芽孢杆菌 (BacUlusmegaterium);于洁等人⑸从49 株细菌 中筛选出一株典型海洋细菌产黑假交替单胞菌 (Pseudoalteromonas nigrifaciens)，其培养液处理松材线虫 24 h 校 正 死亡 率可 达 82% ;雷敬超等 人 []从 海 洋 放线