Stent涂层材料生物相容性的改良研究.pdfVIP

Stent 涂层材料生物相容性的改良 1 2 1 2 王华杰 刘新铭 孙庆申 王瑾晔* 1 上海交通大学生命科学技术学院 2 中国科学院上海有机化学研究所 摘要 本研究利用玉米醇溶蛋白 zein 的特殊溶解性 制备出粒径可控的肝素/玉米醇溶蛋白微球 并考察了微球包封率等 同时通过体外实验对微球混悬液的释放动力学进行了初步研究 结果显示 玉米醇溶蛋白及其降解产物具有良好的生物相容性 由玉米醇溶蛋白制备的含药微球对药物的包封率 在2%-20%之间 粒径大小在几十纳米到几十微米之间 通过调节药物/蛋白配比可以控制含药微球粒 径 体外释放动力学结果显示药物/蛋白微球具有一定的缓释作用 关键词 玉米醇溶蛋白 微球 释放动力学 缓释 [1] 目前 stenting 技术与放疗和化疗已成为心血管疾病治疗的主要手段 随着stenting 技术的日益 成熟 人们开发了多种 stent 材料 但生物相容性始终是其难以克服的首要问题 在应用时 往往会 引起急性血管阻塞[2] 导致血管再狭窄和血栓形成 所以 需要持续数天给病人注射抗凝血剂 这无 论在身体还是心理上都给病人带来了很大痛苦 目前针对stent 材料引发的心血管继发性病变主要有四种解决方法 一是在stent 材料表面涂一层 抗凝血药物[3] 这种方法已经取得了一定的进展 但由于抗凝血药物与材料表面键合弱 涂层很容易 被血流剥离 难以达到预期目的 第二种方法是对 stent 材料表面进行化学修饰 使其具有良好的生 物相容性 尤其是血液相容性 这种方法应用最为广泛 其中磷脂分子作为修饰分子已经有许多报[4] 第三种方法是给病人连续服用 或注射 抗凝血药 虽然它可以实现抑制血栓形成的目的 但引起大 出血的几率增高 而且通过口服给药时 如果没有合适的药物载体或药物剂型 则很难达到预期的血 药浓度[5] 第四种方法是在材料表面种植由病人自身分离的内皮细胞 形成单细胞层后可阻止血液与 材料接触 抑制凝血因子的活化[6] 而肝素是一种天然的粘多糖 具有优良的抗凝血性能 在临床上 得到了广泛的应用[7] 我们通过对玉米醇溶蛋白及其降解产物的生物相容性 玉米醇溶蛋白/肝素微球的制备方法 微 球粒径控制 体外肝素的释放动力学等方面进行探讨 希望改进stent 涂层材料的生物相容性 1 材料与方法 1.1 玉米醇溶蛋白及其降解产物对人脐带静脉内皮细胞 HUVECs 增殖的影响 1.1.1 玉米醇溶蛋白微球的降解 将玉米醇溶蛋白 Wako Pure Chemical Industries, LTD, Japan 悬浮在胃蛋白酶溶液中 pH 2.2 0.3%的柠檬酸缓冲液 放置在37 恒温箱中 30rpm 搅拌消化 1.1.2 细胞种植 试验分组 对照组 control 组 薄膜组 zein films 和降解产物组 products 将第二代HUVECs 用0.025%的胰蛋白酶-0.02%EDTA-Na 溶液消化后 以适当的浓度接种于培 养板内 培养条件为48 孔培养板 含20%FBS 的RPMI- 1640 细胞培养液 100U/mL 青霉素 100ug/mL 硫酸链霉素 30ug/mL 内皮细胞生长助剂 90ug/mL 肝素 37 5%的二氧化碳培养箱培养 定期更 换培养液 待细胞浓度适当后 MTT 法检测细胞活力 1.2 玉米醇溶蛋白/肝素微球制备 将肝素 Sigma, America 和玉米醇溶蛋白分别溶解在60% 乙醇溶液中 二者混匀后 加入37 预热的去离子水 迅速调整乙醇浓度为 40% 使蛋白微球析出 用干冰-丙酮溶液将微球混悬液快速 冷冻 然后真空冷冻干燥过夜 得干粉 1.3 玉米醇溶蛋白/肝素微球形态特征 将玉米醇溶蛋白微球粉末平铺在样品台上的双面胶表面 直接采用真空喷镀法对微球表面镀金 扫描电子显微镜 SEM, S-450, Hita