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脑心康片对脑缺血大鼠细胞凋亡相关蛋白p53表达的影响 ? 84? 中医药信息 InformationonTmditionalChineseMedieine 2009年第26卷第3期 Vo1.26,No.3,2009 脑心康片对脑缺血大鼠细胞凋亡 相关蛋白P53表达的影响 白云,苏慧,苏云明 (黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨150040) 摘要:目的:观察脑心康片对局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用,并进一步探讨其作用机制.方法:采 用线栓法阻断大鼠一侧大脑中动脉(MCAO)制备局灶性脑缺血模型,观察脑心康片对MCAO模型大鼠 脑缺血后24,48,72h神经功能缺损导致的行为学变化,并以免疫组化法检测其对上述三个时间点大脑 皮质细胞凋亡相关蛋白P53表达的影响,以此探讨脑心康片抗细胞凋亡及对脑缺血的神经保护作用. 结果:脑心康片能抑制MCAO模型大鼠大脑皮质P53蛋白表达.结论:脑心康片对大鼠局灶性脑缺血 具有保护作用,其机理可能与脑心康片影响凋亡相关蛋白P53的表达有关. 关键词:脑缺血;脑心康片;细胞凋亡;P53 中图分类号:R285.5文献标识码:A文章编号:1002—2406(2009)03—0084～03 脑血管疾病是神经系统的常见病,多发病,是目 前引起人类死亡的三大疾病之一.缺血性脑卒中是多 种原因引起的一种临床病理状态,其脑组织损害是产 生临床征象的病理基础.在本病的预防,治疗和康复 方面,中医药具有较为显着的疗效和优势¨j.临床应 用脑心康片治疗脑缺血,取得满意疗效.本课题旨在 通过对大鼠脑神经损伤的行为学改变,凋亡相关基因 P53表达的观察,探讨脑心康片对脑缺血再灌注损伤 的神经保护作用及其作用机制.现报道如下. 1实验材料 1.1动物Wistar大鼠,雄性,体重(300±20)g,由黑 龙江中医药大学实验动物中心提供,动物许可证号:黑 动字大鼠自由进食,饮水,手术前12h禁 食,不禁水. 1.2药品与试剂 脑心康片(由蝙蝠葛酚性碱50%,水蛭素50%组 基金项目:黑龙江省中医管理局指导课题(2008);2005年黑龙江省攻 关课题(GC05C31403);2007年哈尔滨市优秀学科带头人基 金(4040282) 作者简介:白云(1974一),女,讲师,现为黑龙江中医药大学2006级中 西医结合基础专业博士研究生. 通讯作者:苏云明(1949一),男,教授,博士研究生导师,主要从事中 药现代药理学研究. 收稿日期:2008—09—10 修回日期:2008—09—29 成,黑龙江中医药大学实验中心制备);尼莫地平片(天 津中央药业有限公司生产);银杏叶片(唐山荣大药业有 限公司生产);p53抗体(美国SANTACruz公司生产); PV6001二步法检测试剂盒(北京中杉金桥). 1.3实验仪器YT一6生物组织摊烤片机(湖北); 生物组织包埋机(湖北孝感);DGX一9143B一1电热鼓 风干燥箱(上海福玛);光学显微镜(OlympusJapanBH 一 2);Q5O0IW图像分析仪(德国Leica). 2实验方法 2.i分组及给药方法Wistar雄性大鼠随机分成脑 心康片高,中,低剂量组,西药阳性对照组,中药对照 组,模型对照组及假手术组,除假手术组24只外,其余 每组30只大鼠.其中脑心康片高剂量组给予脑心康 片100mg?kg一;脑心康片中剂量组给予脑心康片5O mg?kg～;脑心康片低剂量组给予脑心康片25 mg?kg～;西药阳性对照组给予尼莫地平片21.6 mg?kg～;中药阳性对照组给予银杏叶片135 mg?..;模型对照组及假手术组给予等容积生理盐 水.各组均灌胃给药,连续7天,在末次给药30min 后,对大鼠实施右侧大脑中动脉阻塞模型手术. 2.2右侧大脑中动脉阻塞(MCAO)模型制作 采用稍加改良的Longa…方法,将Wistar大鼠制 备MCAO模型.MCAO术后(大鼠意识恢复后30min) 对脑缺血大鼠神经功能缺陷进行评分,MCAO术后计 2009年第26卷第3期 Vo1.26,No.3,2009 中医药信息 InformationonTraditionalChineseMedicine?85? 分在1～3分者纳入研究. 2.3脑组织P53蛋白含量测定 行为学检测完毕后,用10%水合氯醛麻醉(350 mg?kg),快速开胸暴露心脏,剪开右心耳,经左心 室插管至升主动脉内,于5min内快速灌注150ml左右 肝素化生理盐水,随后滴注含4%多聚甲醛的0.1 mol?L磷酸缓冲液200ml,缓慢灌注并固定.灌注 完毕,从枕骨大孔剪开,完整取脑,在相同固定液中 4℃固定不超过48h.再制作病理组织片;以PV一 6001二步法操作,终止反应后,苏木素复染,清水冲洗 返蓝,梯度乙醇脱水,二